| 61ª Reunião Anual da SBPC |
| C. Ciências Biológicas - 10. Microbiologia - 2. Microbiologia Aplicada |
| ISOLAMENTO E SELEÇÃO DE LEVEDURAS ASSOCIADAS A Nasutitermes sp. COM POTENCIAL BIOTECNOLÓGICO |
| Italo Thiago Silveira Rocha Matos 1 Luciana Araújo Cassa-Barbosa 2 Spartaco Astolfi-Filho 3 |
| 1. Programa de Pós-Graduação em Diversidade Biológica / ICB / UFAM 2. Programa Multi-Institucional de Pós-Graduação em Biotecnologia 3. Centro de Apoio Multi-Disciplinar / UFAM |
| INTRODUÇÃO: |
A utilização de leveduras com fins biotecnológicos data desde os tempos mais remotos, como por sumérios e babilônicos na produção de cerveja 6000 a.C. (DEMAIN & SOLOMON, 1981). Atualmente utilizam-se leveduras nos mais diversos ramos biotecnológicos como na produção de proteases (SILVA NEVES et al., 2006), adoçantes (CARVALHO et al., 2007) e bioetanol, sendo este último um dos o mais difundidos empregos biotecnológicos das leveduras. A fermentação alcoólica de hidrolisado hemicelulósico de cana-de-açúcar pode aumentar a atual produção brasileira de etanol em até 40% (ROSSELL, 2007) sem a necessidade de expandir a área plantada em um único hectare. Segundo Breznak (1982), a assimilação de polissacarídeos em cupins é dirigida pela atividade da microbiota endossimbiótica, sendo esta um dos mais interessantes exemplos de comunidade microbiana simbiótica (PRILLINGER et al., 1996). O objetivo deste trabalho foi isolar e selecionar leveduras associadas a cupins (Nasutitermes sp., Isoptera, Insectae) segundo sua capacidade de metabolizar hidrolisado hemicelulósico, capacidade de produzir a-amilase, habilidade em fermentar glicose e assimilar D-xilose, o monossacarídeo mais abundante na fração hemicelulósica (SAHA, 2003). |
| METODOLOGIA: |
Foram coletados 20 exemplares de Nasutitermes sp. em um ninho estabelecido sobre tronco de mangueira (Mangifera indica). Os espécimes tiveram o abdome separado do restante do corpo e foram inoculados, dois a dois, em 1,0 mL de meio hidrolisado ácido de bagaço de cana-de-açúcar (HACA) com açúcar redutor a 1% e Yeast Nitrogen Base (YNB) a 6,7 g/L. Após incubação a 35 oC por 24 horas, foram coletados 100 mL do meio líquido e semeados em meio HACA (Agar: 20 g/L, YNB: 6,7 g/L e AR: 1%). As colônias de leveduras foram repicadas e purificadas. A capacidade fermentativa foi testada usando 5% de glicose e 6,7 g/L de YNB em meio líquido contendo um tubo de Durham invertido. As colônias isoladas foram submetidas ao teste de assimilação de xilose pela técnica replica-plating. Para análise qualitativa de degradação amido, utilizou-se meio sólido contendo solução de sais (NaNO3 3,0 g/L, K2HPO4 1,0 g/L, MgSO4 0,5 g/L, KCl 0,5 g/L e FeSO4 0,01 g/L) e 1% (p/v) de amido, para verificar a produção de a-amilase. As culturas foram incubadas por 48 horas e coradas com vapor de iodo para verificar a formação de halos. |
| RESULTADOS: |
| Foram isolados ao todo 54 colônias de leveduras, tendo identificação confirmada por microscopia de luz. Os isolados foram denominados pelo código LCXX, sendo XX correspondente ao número de ordem do isolado depositado em coleção. As colônias isoladas foram cultivadas em meio HACA líquido por 48 horas e preservadas em glicerol 25% (v/v) a –20 oC. A assimilação de D-Xilose foi observada em 12 colônias (LC27 a LC35). A secreção de a-amilase foi observada no isolado LC29. No teste de fermentação em meio líquido (glicose 5% + YNB 6,7 g/L), apenas o isolado LC08 apresentou desprendimento de gás, retido no tubo de Durham, indicando capacidade fermentativa. |
| CONCLUSÃO: |
| Embora todos os isolados sejam capazes de metabolizar hidrolisado ácido de cana-de-açúcar, apenas 12 destes apresentam capacidade de assimilar D-xilose. Nas condições utilizadas, LC29 é produtor de a-amilase, aplicável na hidrólise parcial de polímeros de amido para posterior fermentação. O isolado LC08 mostrou-se capaz de fermentar glicose, podendo ser utilizado na fermentação de substratos ricos neste monossacarídeo. |
| Instituição de Fomento: CNPq |
| Palavras-chave: Leveduras, Nasutitermes sp., Potencial biotecnológico. |