Muitas espécies pertencentes à família Lauraceae são aromáticas, dentre elas o pau-rosa (Aniba rosaeodora). O Óleo essencial de pau-rosa apresenta alta complexidade química, rico em terpenos, principalmente o linalol (SIANI et al., 2002).  Os terpenos são o mais diverso conjunto de produtos naturais conhecidos e estão envolvidos em rotas de sinalização química e defesa contra patógenos e pragas (CARDOSO, 2004), o que tem levado ao isolamento de enzimas envolvidas na sua biossíntese em diversas espécies para uso em engenharia metabólica em plantas. A biossíntese de terpenos ocorre a partir de metabólitos primários em pelo menos duas rotas distintas, a rota citoplasmática do ácido mevalônico e a rota biossintética plastídica. Essas duas rotas têm sido elucidadas em plantas e microrganismos, e os genes que codificam as enzimas de ambas as rotas tem sido identificados (RODRIGUEZ-CONCEPICION AND BORONAT, 2002; LANGE AND GHASSEMIAN, 2003). Considerando a alta eficiência do pau-rosa na biossíntese de terpenos, o presente trabalho tem como objetivo principal identificar genes envolvidos nesta rota em pau-rosa.

Folhas jovens de pau-rosa (Aniba roseadora Ducke), cultivadas no Horto de Plantas medicinais do Centro Universitário Nilton Lins, foram coletadas e o DNA genômico extraído, utilizando-se o método CTAB (brometo de cetitrimetilamonia) modificado. Oligonucleotídeos degenerados foram desenhados a partir de sequências de genes envolvidos na biossíntese de terpenos em plantas e foram utilizados na Reação em Cadeia da Polimerase (PCR) para a amplificação de fragmentos homólogos em pau-rosa. Os fragmentos correspondentes a cada combinação de oligonucleotídeos foi separado em gel de agarose e corados com brometo de etídeo. Os fragmentos individuais foram excisados do gel, purificados com o auxílio do “Wizard SV Gem and PCR Clean-Up System” (Promega Corporation) e posteriomente clonados no vetor pGEM-T Easy (Promega Corporation). Os fragmentos clonados foram sequenciados e suas sequências comparadas com outras sequências de genes envolvidos na biossíntese de terpenos em plantas depositadas em banco de sequências internacional (NCBI).

Um total de 28 fragmentos foram amplificados pela Reação em Cadeia da Polimerase (PCR), sendo que 14 deles foram clonados no vetor pGEM-T Easy (Promega) e utilizados na transformação de E. coli DH5α.  Os fragmentos clonados foram sequenciados e suas sequências comparadas com outras sequências de genes envolvidos na biossíntese de terpenos em plantas depositadas em banco de sequências internacional (NCBI). A seqüência do clone pNL005 apresentou 66% de homologia com a seqüência de aminoácidos da proteína tipo cinase MAP3K de Arabdopsis thaliana  e com outras proteínas cinases de outras espécies vegetais. A seqüência de aminoácidos obtida a partir do clone pNL005 foi alinhada com as seqüências de MAP-cinases de outras espécies, utilizando-se a ferramenta de alinhamento múltiplo Clustaw Bioedit (www.bioedit.com).

As seqüências dos fragmentos foram determinadas e contrastadas com as seqüências depositadas no GenBank. Nenhum dos fragmentos apresentou homologia com outros genes envolvidos na biossíntese de terpenos em plantas, mas o clone pNL005 apresentou homologia significativa com o gene MAP3-cinase de A. thaliana e com outras MAP-cinases depositadas no GenBank. Novas metodologias, entre elas a construção e o sequenciamento de uma biblioteca de cDNAs serão necessárias para este objetivo.