61ª Reunião Anual da SBPC
C. Ciências Biológicas - 8. Genética - 2. Genética de Microorganismos
AVALIAÇÃO DOS ISOLADOS DO BACULoVíRUS DE POLIEDROSE NUCLEAR DE Trichoplusia ni EM RELAÇÃO À VIRULÊNCIA E PADRÃO ELETROFORÉTICO DAS SUAS PROTEÍNAS VIRAIS
Natália Martins da Silva 1, 2
Rafaelle Maria Paz Nepomucena 1, 2
Ângela Lucia Carvalho de Andrade 1, 2
Márcia Jaqueline Mendonça Marciel 1, 2
Helena Camarão Telles Ribeiro 1, 3
Rodolfo Lagos Mônaco 1
1. Universidade do Estado do Amazonas (UEA)
2. Aluna de Mestrado em Biotecnologia e Recursos Naturais
3. Orientadora
INTRODUÇÃO:

Os vírus de insetos do grupo Baculovírus constituem alvo de numerosas pesquisas devido ao seu grande potencial econômico na luta biológica contra pragas de agricultura. Todavia, o emprego desses vírus como inseticidas biológicos requer conhecimento dos efeitos e dos mecanismos de ação em relação aos seus hospedeiros. Desse modo o objetivo deste trabalho, foi o de estudar os efeitos de 20 passagens seriadas, método de seleção genética, do vírus de Poliedrose Nuclear de Trichoplusia ni (VPNTn) para o hospedeiro alternativo, Diatraea saccharalis, principal praga da cana-de-açúcar em toda a América. Para verificar se ocorreu diferenciação destes vírus em nível de proteínas estruturais, realizou-se a eletroforese das amostras em gel de SDS-poliacrilamida.  

METODOLOGIA:

Em cada passagem seriada, para a inoculação, o vírus era purificado pela homogenização de larvas infectadas contendo 1% de feniltiuréia para prevenir melanização. Grupos de larvas no 3° instar eram alimentadas com discos de dieta tratados com 5 doses diferentes do VPNTm. Grupos controle eram alimentados com discos de dieta com água. A mortalidade era checada diariamente e a infecção por VPNTn era confirmada pela microscopia de contraste de fase de tecidos representativos de D. saccharalis. Para a análise comparativa das proteínas virais, foram utilizados poliedros dos isolados VPNTn, VPNTnF15  e VPNTnF20. A eletroforese processou-se em placas de vidro, em gel de poliacrilamida – SDS, usando um gel concentrado 5% e gel, de corrida 20%. A corrida foi feita em tampão de eletroforese à temperatura ambiente, à 20 mA a 50V durante a migração das amostras com gel concentrado e a 40 mA a 120V até o final do gel de corrida. Os géis após descoramento foram guardados em uma solução de 2,5% de ácido acético.

RESULTADOS:

Os resultados mostraram que o VPNTn foi capaz de infectar-se no hospedeiro alternativo, D.saccharalis. Para avaliar a ocorrência de qualquer variação na virulência dos isolados obtidos de VPNTn submetidos a 20 passagens seriadas em D. saccharalis, foram calculados os valores do DL50 , cujos cálculos foram obtidos pelo método Probit. Verificou-se que o isolado VPNTnF11 mostrou uma redução no valor do DL50 de 800 vezes após 11 passagens seriadas em D. saccharalis, quando comparado com o vírus original obtido de larvas de Trichoplusia ni. Constatou-se que após as 11 passagens seriadas, o vírus se estabilizou no hospedeiro alternativo. Comparando-se os padrões eletroforéticos protéicos do VPNTn e do seu isolado selecionado VPNTnF20 constatou-se que os mesmos apresentaram o mesmo padrão proteico de 22 bandas polipeptídicas com os mesmos pesos moleculares de 11.000 a 135.000 daltons sendo a banda mais intensa a de 30.000 daltons que corresponde a poliedrina. Em desacordo com o descrito na literatura, que menciona diferenças no padrão eletroforético de proteína quando o vírus é inoculado em um hospedeiro alternativo, nossos resultados mostraram que o VPNTnP e o isolado selecionado VPNTnF20 não apresentaram diferenças quanto a seus  padrões eletroforéticos das suas proteínas virais.

CONCLUSÃO:

A passagem seriada de um hospedeiro alternativo é um método eficiente para a indução de alterações da virulência do vírus de Poliedrose Nuclear de Tricloplusia ni. O VPNTnP e o isolado selecionado VPNTnF20 não apresentaram diferenças quanto a seus polipeptídeos, quando analisados em gel de SDS e poliacrilamida, indicando que o aumento de virulência dos isolados selecionados não ocorreram a nível protéico.

Instituição de Fomento: Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / CNPq
Palavras-chave: Baculovírus, Virulência, Hospedeiro alternativo.