61ª Reunião Anual da SBPC

C. Ciências Biológicas - 3. Bioquímica - 1. Biologia Molecular

ESTUDO DA COAGULAÇÃO SANGÜÍNEA EM Bothrops jararaca (BJ): PURIFICAÇÃO E CARACTERIZAÇÃO DO FATOR X DO PLASMA DA BJ.

Alexandre Leite de Figueiredo Júnior ¹
Anita Mitiko Tanaka-Azevedo ¹
Carolina Okamoto Vieira ^{1, 2}
Karen Moraes ^{1, 2}

1. Instituto Butantan/IB (Laboratótio de Fisiopatologia)
2. Instituto de Biociência/USP (Departamento de Fisiologia))

INTRODUÇÃO:

O fator X (FX) é uma glicoproteína proteolítica, pertencente ao grupo de proteínas dependentes de vitamina K (PVDK) (Suttie,1992). Ocupa um papel central no esquema de coagulação, sendo sua ativação um ponto de convergência entre as vias intrínseca e extrínseca. É constituído por duas cadeias (leve e pesada) ligadas por uma única ponte dissulfeto. Em humanos a cadeia leve tem massa molecular de 17,5 KDa e a cadeia pesada tem massa molecular de 45 KDa e possui o peptídeo de ativação e o domínio serino protease (Rudolph, Mullane et al. 1997).

Considerando-se a escassez de informações a respeito da coagulação em répteis e a importância de entender como ocorre a coagulação nestes animais, este trabalho tem como objetivo a purificação e caracterização do FX a partir do plasma da serpente B. jararaca e compará-lo com o fator humano e de outros animais.

METODOLOGIA:

O FX foi purificado do plasma da BJ seguindo três passos de cromatografia: coluna Q-Sepharose Fast Flow, coluna Hi Trap DEAE Fast Flow e coluna Hi Trap Heparina, respectivamente. A proteína obtida foi mensurada através da leitura de absorbância a 280 nm. O FX ativado foi mensurando através da utilização do substrato cromogênico S-2765 e a leitura foi feita a 405nm. O FX purificado foi analisado por eletroforese SDS-PAGE.

RESULTADOS:

Os resultados obtidos através deste método de purificação mostram que o fator X purificado da serpente Bothrops jararaca apresenta massa molecular de 80 KDa que é menor quando comparado com o fator X de humanos (62 KDa), ratos (56 KDa) e bovinos (55 KDa). Porem, quando comparado com suínos apresenta mesma massa molecular.

CONCLUSÃO:

Foi desenvolvido um método para a purificação do fator X de Bothrops jararaca utilizando passos de cromatografias aniônicas e de afinidade.

Instituição de Fomento: CNPQ, FAPESP e CAPES.

Palavras-chave: purificação, fator X, Bothrops jararaca.