O vírus dengue (DV), membro da família Flaviviridae, é um patógeno humano responsável por elevadas taxas de infecções e mortes nos países tropicais e subtropicais. Uma das razões para a ausência de abordagens terapêuticas adequadas se deve ao desconhecimento dos mecanismos moleculares envolvidos na interação do DV com as células do hospedeiro. No entanto, evidências sugerem que a regulação de diferentes etapas do metabolismo celular exerce um papel crucial tanto na replicação viral quanto na resposta do hospedeiro à infecção. Estudos recentes demonstraram o papel dos corpúsculos lipídicos (CL) - organelas citoplasmáticas presentes em virtualmente todas as células de mamíferos - na infecção pelo vírus hepatite C, com implicações na sua capacidade replicativa e infecciosa. Temos evidências de que os CL não são apenas locais de armazenamento celular de lipídios, mas são estruturas dinâmicas, altamente reguladas, que aumentam em número e tamanho em uma variedade de processos inflamatórios e que desempenham funções como domínios envolvidos no metabolismo lipídico, sinalização celular, formação de mediadores inflamatórios e no tráfego de membranas. Considerando que o envolvimento dos CL na infecção pelo DV ainda não foi avaliado, resolvemos investigar esse processo in vitro.

A indução da formação de CL pelo DV foi estudada nas células BHK (Baby Hamster Kidney) e HepG2 (Hepatoma humano). As células em cultura foram infectadas com o vírus DV2 ativo ou inativado por calor, na razão de 4 vírus/célula, durante 2h. Após 24 ou 48h, as células foram coradas com tetróxido de ósmio para avaliação e quantificação dos CL por microscopia óptica. O tráfego de proteínas virais e sua interação com os CL foram avaliados através da técnica de imunocitoquímica associada à incorporação de lipídios fluorescentes (bodipy), usando dupla-marcação com anticorpo específico para a proteína do capsídeo do DV2. Estes resultados foram confirmados por Western blotting, utilizando frações de CL purificadas através do gradiente de sacarose após o rompimento das células por cavitação em nitrogênio. Utilizamos abordagens farmacológicas com drogas que atuam sobre a inibição da formação de CL, tais como o C75 e o Triacsin C, e avaliamos o impacto da inibição da sua formação sobre a replicação viral pelas técnicas de infecção das células com DV2 carregando o gene reporter luciferase ou por PCR em tempo real. Os dados obtidos nesse estudo foram comparados através do teste Newman-Keuls-Student, considerando significativos os valores de p<0,05.