61ª Reunião Anual da SBPC

D. Ciências da Saúde - 2. Medicina - 2. Cirurgia

ESTUDO DO GEN DA CONEXINA32 (Cx32) NOS PACIENTES PORTADORES DE BÓCIOS DE GRANDE VOLUME SUBMETIDOS À TIREOIDECTOMIA EM MANAUS

João Bosco Botelho 1 Spartaco Astolfi Filho 2 Enedina Nogueira Assunção 2 Janice Barros Monteiro 2 Diego Monteiro de Carvalho 1 Enio Martins Medeiros 1

1. Escola Superior de Ciências da Saúde da Universidade do Estado do Amazonas UEA 2. Centro de Apoio Multidisciplinar da Universidade Federal do Amazonas CAM/UFAM

INTRODUÇÃO:

Os bócios representam doença freqüente nos países com áreas geográficas bociogênicas, que não obtiveram êxito completo nos programas de iodação do sal de cozinha. No Amazonas, a imensidão territorial dificultando o acesso dos programas de saúde pública junto às populações que moram em comunidades longe dos centros urbanos municipais, aliado ao uso doméstico do sal grosso, não iodado, mais barato, e dos alimentos derivados da mandioca, são fatores que estão relacionados aos bócios de grande volume. Mas, apesar da clara relação social, só alguns membros dos grupos humanos submetidos às mesmas condições apresentam bócios de diferentes tipos, inclusive os de grande volume, o que suscita a pré-existência de condições genéticas favorecedoras da bociogênese. Este trabalho objetivou pontuar possíveis alterações nucleotídicas no gene GJB2, codificador da proteína Cx32, através do método de seqüenciamento, em pacientes portadores de bócios de grande volume submetidos à tireoidectomia em Manaus.

METODOLOGIA:

Foram coletados aproximadamente 3ml de sangue de 81 pacientes com bócios, malignos e benignos, para comporem banca de DNA genômico de patologias da tireóide, seguida da extração e quantificação de DNA. As amplificações do gene da conexina 32 pelo método de PCR foram obtidas por meio dos oligonucleotídeos (primers), específicos para o gene GJB2, utilizando os primers cx32a_F e R(5’GCACAGACATGAGACCATAGG3’ e 5’TCTTCACCGTCTTCATGCT3’), no grupo de pacientes com diagnóstico de bócio multinodular atóxico, e, posteriormente, o seqüenciamento em MEGABACE100® com o kit (DYEnamic ET TERMINATOR AMERSHAM PHARMACIA) com analise no Phred e alinhamento Bhlast.

RESULTADOS:

Foram encontrados valores significativos de e-value quando comparados com seqüências no banco de dados no NCBI e todos os resultados demonstram similaridade com gene da conexina 32, ou genes relacionados com a conexina de Mus musculus (Cx32 gene for connexin, alternative transcripts 1, 2 e 3) e Homo sapiens (gap junction protein, beta 1, variant 1, mRNA) 32kDa (GJB1), transcript como os genes GJB1 e GJB2, demonstrando que o par de primer que amplifica o fragmento de 660 pares de bases é específico para essa região da conexina 32. Os dados obtidos no seqüenciamento dos fragmentos do gene da conexina 32 e as análises com ferramentas da bioinformática demonstraram que o seqüenciamento das amostras 1,7; 2.11 e 3.2 obtiveram score de bases lidas 923/93; 626/90; 663/91 respectivamente, com qualidade igual e superior a 90 analisados no phred, todos com índices maiores que 31 (Maximo de qualidade). Na análise pelo Blast quanto à similaridade da seqüência do gene conexina na amostra 1.7 observaram-se duas variações alélicas de C para T (transição); na amostra 2.11 duas variações de G para T (transversão) e na amostra 3.2 verificou-se duas variações alélicas de C para G (transversão).

CONCLUSÃO:

Este estudo demonstrou que o gene da conexina 32 apresenta alterações nucleotídicas de transição e transversão em pacientes portadores de bócio multinodular atóxico, demonstrando a possibilidade da participação deste gene na multifatorialidade da doença. Também é razoável articular, como proposta teórica, que essa alteração gênica esteja ausente nos pacientes que são submetidos aos mesmos estímulos e não desenvolvem o bócio, sendo necessários outros estudos a respeito do tema.

Instituição de Fomento: Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado do Amazonas - FAPEAM

Palavras-chave: nucleotídeos, bócio, sequenciamento.