61ª Reunião Anual da SBPC

C. Ciências Biológicas - 10. Microbiologia - 2. Microbiologia Aplicada

CONSTRUÇÃO E CARACTERIZAÇÃO DE VÍRUS INFLUENZA RECOMBINANTES CARREANDO SEQÜÊNCIAS DE TRYPANOSOMA CRUZI

Rafael Polidoro Alves Barbosa 1, 2 Alexandre Vieira Machado 1 Maurício Martins Rodrigues 3, 4 Ricardo Tostes Gazzinelli 1, 2

1. Centro de Pesquisas René Rachou - FIOCRUZ, Belo Horizonte, MG, Brasil 2. Departamento de Bioquímica e Imunologia, Universidade Federal de Minas Gerais, B 3. Departamento de Imunologia do Instituto de Ciências Biomédicas da Universidade d 4. CINTERGEN - Centro Interdisciplinar de Terapia Gênica, São Paulo, SP, Brasil

INTRODUÇÃO:

Apesar dos notáveis avanços na ciência ao longo do último século, as doenças parasitárias são grave problema de saúde pública nos países em desenvolvimento. Dentre tais doenças, merece menção a doença de Chagas, a qual é causada pelo protozoário intracelular Trypanosoma cruzi. Estima-se que a doença de Chagas é a causa da morte de aproximadamente 23 mil pessoas a cada ano. Atualmente, não existem vacinas disponíveis contra esse parasita e a terapia medicamentosa é muito ineficaz, fazendo desta uma importante área de pesquisa a ser desenvolvida. Os vírus recombinantes são candidatos interessantes para o desenvolvimento de vacinas contra doenças parasitárias, sendo que diversos estudos já demonstraram que uma resposta imune heteroespecífica mais eficaz pode ser observada quando dois vetores virais diferentes foram utilizados para a primeira e para a segunda imunização (sistema heterólogo de indução e reforço da resposta imune). Dentre tais vírus, citamos os vírus influenza A, cujo genoma é constituído de oito segmentos de RNA de polaridade negativa e pertencem à família Orthomyxoviridae, em que técnicas de modificação genética estão estabelecidas.

METODOLOGIA:

Utilizando a técnica de biologia molecular conhecida como genética reversa pudemos construir vírus influenza recombinantes carreando porções das seqüências codificadoras das proteínas trans-sialidase (TS) e da proteína de superfície 2 das formas amastigotas (ASP-2) do T. cruzi. Técnicas de virologia, cultivo celular, infecção, western blotting, PCR-transcriptase reversa, entre outras, foram utilizadas na caracterização genotípica e fenotípica dos vírus gerados. Testes em camundongos foram realizados para determinar a resposta imunológica induzida por imunizações com esses vírus em combinação com adenovírus recombinantes para os mesmos antígenos.

RESULTADOS:

Os vírus obtidos se mostraram geneticamente estáveis após duas clonagens e uma primeira etapa de amplificação em células MDCK. Além disso, nós demonstramos a capacidade dos vírus influenza recombinantes carreando a um fragmento da TS em expressar essa seqüência heteróloga em cultura celular. A combinação heteróloga entre Flu-ASP2 e Ad-ASP2 foi capaz de induzir uma resposta imunológica humoral significativa em camundongos imunizados.

CONCLUSÃO:

Os resultados obtidos são promissores quanto à segurança e estabilidades dos vírus influenza recombinantes gerados, bem como sua capacidade de expressar os segmentos heterólogos introduzidos, sendo, em teoria, portanto, capazes de induzir proteção em experimentos de desafio contra a cepa Y de Trypanosoma cruzi. Novos vírus serão gerados e testes imunológicos serão realizados com todos eles em diferentes combinações entre si e com outros vírus para melhorar as respostas imunológicas apresentadas.

Instituição de Fomento: FIOCRUZ/CNPq , FAPEMIG

Palavras-chave: Vírus recombinantes, Trypanosoma cruzi, Protocolo heterólogo de indução-reforço da resposta imune.