61ª Reunião Anual da SBPC
C. Ciências Biológicas - 3. Bioquímica - 5. Química de Macromoléculas
OBTENÇAO DE CONCENTRADO PROTEÍCO COM ATIVIDADE PEROXIDÁSICA A PARTIR DOS FRUTOS DA PUPUNHEIRA (Bactris Gasipaes, Kunth)
João da Silva Carneiro 1
Claudio Nahum Alves 1
Everson Alves Miranda 2
Alberdan Silva Santos 1
1. ICEN, programa de pós gradução em Química/UFPA
2. Faculdade de Engenharia Química/UNICAMP
INTRODUÇÃO:
Peroxidases são enzimas oxiredutases que atuam como monooxigenases e podem catalisar reações de monooxigenação, tendo como substratos alvos uma grande variedade de substâncias orgânicas (FORSYTH e ROBINSON, 1998). A inserção de oxigênio em grupos alilas ou alquilas gerando epóxido, cetona, aldeído ou álcool é de grande importância na geração de novas estruturas de caráter hidrossolúvel com atividades biológicas. A busca por enzimas robusta que apresentem grande potencial de oxirreduçao e que atuem em uma grande variedade de substrato tem atraído a atenção de investigadores da área de produtos naturais visando à modificação estrutural de diversas substâncias químicas. Neste sentido, peroxidases vegetais se apresentam com uma alternativa de uso em bsformaçoes, tendo com alvos substâncias abundantes presentes em óleos essenciais. Neste estudo, a pupunheira (Bactris gasipaes, Kunth) apresenta uma alternativa como fonte abundante destas enzimas e tem se mostrado promissora na geração de concentrados enzimáticos de seus frutos. Extratos aquosos dos frutos de duas variedades de pupunha foram processados com acetona obtendo-se concentrados protéico com atividade peroxidásica, as quais estão sendo estudadas para usos futuros em biotransformações de arilpropenos.
METODOLOGIA:

As duas variedades de pupunha foram fornecidas pelos produtores rurais do Distrito de  Mosqueiro-PA. Os frutos V01 (variedade branca) e V02 (variedade amarela) foram triturados em multiprocessador por 2 min, seguida de extração com tampão citrato-fosfato pH 5,0 na proporção 1:4 (m/v) por 1 h a 25±10C. A precipitação das proteínas foi realizada com acetona na razão 1:2 v/v (extrato bruto/acetona). Após a adição do solvente o sistema foi mantido em repouso por 24h a -18ºC. O precipitado foi separado do sobrenadante por centrifugação a 18.000 g por 10 min, a 25±10C, e os teores de proteína e atividade foram determinados. Os teores de proteínas foram determinados pelo método de Bradford (1970) e as atividades peroxidásica pelo método espectrofotométrico direto, segundo Hammerschmidt (1982) adaptado para a análise. Neste procedimento a mistura reacional foi composta de 1000 µL de extrato de bruto (EB) ou precipitado (PPT) ressuspendido, 1700 µL de tampão citrato-fosfato pH 5,0, 200 µL de guaiacol 10 mmol·L-1 e 100 µL de H2O2 10 mmol.L-1. Esta mistura era encubada por 4 min a 25±10C e a absorbância medida a 470 nm.

RESULTADOS:
Para a variedade V02 as quantidades de proteína foram de 17,52mg para o (EB) e 15,18 mg para o (PPT), e para a variedade V01, 13,56mg parao (EB) e 7,86 mg para o (PPT). A atividade específica obtidas para V02: 158U/mg (EB) e 333 U/mg (PPT), para V01: 150 U/mg (EB) e 282 U/µg (PPT). Cálculo de recuperação de proteína mostrou que 87% estavam no precipitado do extrato da variedade V02 e 58% no precipitado da V01, enquanto que foi observado aumento de atividade de 183 e 109% nos respectivos precipitados. Os fatores de purificação das peroxidases foram 2,11 e 1,88 vezes para os precipitados da V02 e da V01, respectivamente.
CONCLUSÃO:
Foi observado que a variedade V02 apresentou maior atividade enzimática que a variedade V01. Nos dois casos, também, os precipitados apresentaram atividades maiores do que os extratos brutos, sugerindo uma purificação das peroxidases presentes. O fato de se ter recuperação de atividade muito maior que 100% para o caso da variedade V02 precisa ser confirmado, podendo ser o resultado de separação no sobrenadante de algum inibidor das peroxidades ou interferente no ensaio de atividade. Com este trabalho foi possível iniciar um estudo de extração e precipitação destas enzimas, purificação requerida para a aplicação destas em reações de oxidações.
Instituição de Fomento: FUNDAÇÃO DE AMPARO A PESQUISA DO ESTADO DO PARÁ/ FAPESPA
Palavras-chave: Peroxidase, precipitação de proteína, Pupunha.