61ª Reunião Anual da SBPC
C. Ciências Biológicas - 8. Genética - 1. Genética Animal
Isolamento de DNAs repetitivos por microdissecção cromossômica, digestão enzimática por AluI e Cot–1 em Steindachneridion melanodermatum (Teleostei: siluriformes)    
Maelin da Silva 1
Daniele Aparecida Matoso 1
Mara Cristina de Almeida 1
Marcelo Ricardo Vicari 1
Roberto Ferreira Artoni 1
1. Universidade Estadual de Ponta Grossa
INTRODUÇÃO:

O emprego de técnicas de citogenética molecular em cromossomos de peixes tem revelado diferentes aspectos de localização e composição de seus cromossomos. O peixe Steindachneridion melanodermatum é um grande bagre da família Pimelodidae endêmico ao rio Iguaçu que apresenta um polimorfismo cromossômico, no qual o cromossomo submetacêntrico 9 sofreu uma amplificação de DNA repetitivo de natureza ainda não elucidada. O presente trabalho teve por objetivo aplicar técnicas de isolamento de sequências de DNA repetitivo no genoma de S. melanodermatum na tentativa de identificar a natureza do polimorfismo cromossômico nesta espécie.

METODOLOGIA:

Três sondas de DNAs repetitivos foram isoladas de S. melanodermatum através de digestão enzimática pela enzima AluI, microdissecção dos cromossomos acrocêntricos e amplificação por DOP/PCR, e pela cinética de reassociação denominada Cot-1. Todas as sondas foram marcadas por fluoróforos específicos e posteriormente hibridadas no complemento cromossômico uma de cada vez. As melhores metáfases foram fotografadas em microscópio óptico com software DP Manager versão 3.1.1 da Olympus, em aumento de 1000x.

RESULTADOS:

A sonda obtida por digestão com a enzima AluI não demonstrou, pela FISH, sinais de hibridação no genoma de S. melanodermatum. Entretanto as outras duas sondas isoladas por microdissecção dos cromossomos acrocêntricos do complemento padrão e Cot – 1 mostraram sinais de hibridação em diferentes locais nos cromossomos. A sonda obtida após DOP-PCR dos cromossomos microdissectados hibridou nas regiões terminais de todos os cromossomos do complemento. A sonda obtida por Cot – 1 hibridou nas porções centroméricas de alguns cromossomos e na região coincidente com 18S+ e AgRON+.

CONCLUSÃO:

Possivelmente as regiões cromossômicas onde os sinais de hibridação foram observados são constituídas por sequências de DNA repetitivo de composições diferentes. Embora esses resultados sejam preliminares e até o presente momento não elucidem a natureza, bem como o evento evolutivo que levou a amplificação do braço longo do cromossomo 9, refletem tendências evolutivas experimentadas pela espécie S. melanodermatum, como verificado pelo acúmulo de heterocromatina de natureza heterogênea evidenciadas em associação as sequências 18S+/AgRON+ e regiões terminais dos seus cromossomos.

Instituição de Fomento: Capes, CNPQ, Fundação Araucária
Palavras-chave: Microdissecção cromossômica, Digestão enzimática, DNA repetitivo.