61ª Reunião Anual da SBPC
C. Ciências Biológicas - 8. Genética - 2. Genética de Microorganismos
OBTENÇÃO DE DNA DOS MICRORGANISMOS RESISTENTES À ALTA CONCENTRAÇÃO DE CÁDMIO, COLETADOS NO CHORUME DO ATERRO SANITÁRIO DE MANAUS
PATRÍCIA ARAÚJO DE SOUSA 1
SÉRGIO RICARDO NOZAWA 1
1. Centro Universitário Nilton Lins
INTRODUÇÃO:

A concentração de cádmio vem aumentando de forma alarmante nas últimas duas décadas no meio ambiente, tendo como principais meios de contaminação os resíduos industriais provenientes de fundições, processos de galvanoplastia, bem como, emissão de gases automotivos. Uma pequena concentração deste metal pode contaminar solo, água e todo organismo vivo ao ambiente associado.  No organismo humano, a bioacumulação pode causar comprometimento cardiovascular, renal, ósseo, reprodutivo além de atuar como agente carcinogênico. Existe uma diversidade microbiológica muito grande no ambiente que utiliza as mais diversas formas metabólicas e adaptativas para permanecerem no ecossistema, como algumas bactérias que podem se adequar e se proliferar em meio contaminado por metal pesado.  Este trabalho visa obter genes de bactérias que são resistentes a altas concentrações de cádmio para posteriormente identificar a bactéria responsável pela utilização do metal em seu metabolismo secundário e assim promoverem uma forma biológica de tratamento de ambientes que possam estar contaminados.

METODOLOGIA:

Foi realizada homogeneização da amostra de microrganismo proliferado em meio de cultura sólido 2XYT à pH 7 e 37oC coletado do Aterro Sanitário de Manaus exposto à 300 µL de cádmio na concentração de 1g/L em 10 mL de meio de cultura líquido 2XTY e adicionou-se mais 300 µL do metal à mesma concentração, incubando-a no shaker à 37oC por 24 horas.  Após a incubação foram feitas 4 amostras (retirada 1mL da solução para cada uma) de extração de DNA genômico. Posteriormente, eletroforese em gel de agarose de 5 µL do DNA obtido de cada amostra. A seguir todas as amostras foram quantificadas usando nanodrop para ser realizada amplificação do gene por PCR com oligonucleotídeos iniciadores para os genes 16S rDNA bacteriano usando 2 µL de template, master mix GoTaq® Green Master Mix, da Promega e 100 pmol de primers 16SF e 16SR. A amplificação das amostras se deu em um termociclador de acordo com o programa 16SS. Outra eletroforese foi realizada sobressaindo a amostra 4 a partir da qual foi feita a purificação do DNA nela contido usando o Kit Wizard® SV Gel and PCR Clean-Up System e então uma nova quantificação.

RESULTADOS:

A partir da extração de DNA do microrganismo cultivado em meio líquido, em 4 amostras, observou-se que existia uma significativa concentração do material genético pela eletroforese em gel de agarose, a qual foi confirmada após quantificação obtendo como resultado uma concentração de DNA igual a: 21,1 ng/ µL, 30,2 ng/ µL, 28,2 ng/ µL e 43,9 ng/ µL nas amostras 1, 2, 3 e 4 respectivamente, mostrando que existem microrganismos no Aterro Sanitário de Manaus resistentes à alta concentração de cádmio. Houve maior comprovação da afirmativa quando a amostra 4 foi purificada e quantificada, pois apenas uma pequena parte do material do PCR fora para eletroforese (10µL), mostrando uma concentração de DNA igual a 6,3ng/µL.

CONCLUSÃO:

Avaliando-se o resultado obtido pode-se inferir que no chorume do Aterro Sanitário de Manaus existem microrganismos resistentes à altas concentrações de cádmio e que o seu crescimento frente a esta adversidade ambiental não é afetado. Podem-se projetar trabalhos futuros para aperfeiçoar a utilização desses microrganismos, após sua caracterização e disponibilidade no banco de dados das sequências de DNA desta microbiota, como matéria de remoção ou diminuição deste metal pesado do ambiente contaminado através de sua utilização pelos microrganismos em seu metabolismo secundário.

Instituição de Fomento: PAIC / FAPEAM
Palavras-chave: Cádmio, Biologia Molecular, PCR.