61ª Reunião Anual da SBPC

C. Ciências Biológicas - 10. Microbiologia - 3. Microbiologia

IDENTIFICAÇÃO E CRIOPRESERVAÇÃO DE MALASSEZIA SPP. MANTIDAS NA COLEÇÃO DE MICRORGANISMOS DE INTERESSE MÉDICO DO INPA

Antônio Carlos Pereira de Oliveira 1 Ana Claudia Alves Cortez 2 José Augusto Almendros de Oliveira 3

1. Instituto Nacional de Pesquisas na Amazônia - INPA 2. Instituto Nacional de Pesquisas na Amazônia - INPA 3. Instituto Nacional de Pesquisas na Amazônia - INPA

INTRODUÇÃO:

As leveduras do gênero Malassezia, são agentes fúngicos associados a quadros patológicos em infecções, como a pitiríase versicolor observada com elevada incidência na região amazônica. Existem sete espécies: Malassezia furfur, M. pachydermatis, M. sympodialis, M. globosa, M. obtusa, M. restricta e M. slooffiae. A identificação de novas espécies desse gênero vem ao encontro da necessidade de um abrangente entendimento da patogênese das dermatoses a elas associadas. As técnicas existentes para a manutenção de fungos em micotecas são trabalhosas e muitas vezes ineficientes. O desenvolvimento de novas formas de preservação de fungos por períodos prolongados se faz necessário. Algumas têm sido descritas como: conservação em meio solido, meio solido coberto com óleo mineral, conservação em água destilada e a criopreservação, a qual utiliza o congelamento das amostras em meios de cultivo líquidos, com ou sem criopreservantes. Devido à elevada patogenicidade dessas espécies, sua identificação se mostra importante para o desenvolvimento de novos tratamentos no combate as afecções provocadas pelo gênero Malassesezia, com especial atenção aqueles pacientes que apresentarem algum tipo de imunodepressão, uma vez que esse gênero vem mostrando resistência a vários tratamentos com antifúngicos.

METODOLOGIA:

As leveduras utilizadas neste trabalho, foram obtidas de pacientes encaminhados por médicos de hospitais e clinicas de Manaus para diagnóstico micológico no Laboratório de Micologia Medica do INPA no ano de 2004. Estão conservadas na Micoteca do INPA e foram repicadas em dois meios de cultura. Das amostras desenvolvidas em Agar – saboraud – bile e oliva foi retirada uma alçada da colônia e adicionada em microtubos contendo miçangas e meio de cultivo liquido, foram levadas ao homogeinizador vortex para a desagregação das unidades formadoras de colônias e acondicionadas em caixas de papelão especificas e levadas a freezer a -70C. Com as amostras desenvolvidas em mdixon foram realizado os testes bioquimicos para identificação das espécies. O primeiro teste a ser feito foi a catalase, que havendo a produção de bolhas revela catalase positiva e a ausência catalase negativa. Foi feito o teste de assimilação do tween em diversas concentrações e a coloração de Gram, para a diferenciação entre as espécies obtusa e globosa, que possuem semelhante assimilação.

RESULTADOS:

As 110 amostras de leveduras selecionadas para o trabalho foram repicadas em ágar saboraud, com suplementação lipídica. A microscopia direta observou-se células redondas ou ovaladas confirmando as características do gênero Malassezia. A reação da catalase foi positiva para 100% (110) das amostras testadas. De acordo com trabalhos anteriores, para classificação das espécies do gênero Malassezia, somente a M. restricta, espécie lipo-dependente apresenta reação de catalase negativa. Nesse trabalho todas as amostras apresentaram reação positiva à catalase. As amostras repicadas em ágar saboraud com cloranfenicol e cicloheximida (39), sem suplementação lipídica apresentaram evidente crescimento, sendo classificadas como M. pachydermatis. Após os testes de assimilação dos Tweens 20, 40, 60 e 80, aplicou-se a chave de diferenciação. Onde foi identificado: M. furfur 21, M. slooffiae 20, M. globosa 13, M. obtusa 12 e M. sympodialis 5. Não foi identificado M. restricta. A criopreservação se mostrou um método eficaz para a manutenção dos fungos utilizados, por manter suas características pelo período testado (12 meses).

CONCLUSÃO:

Este é um trabalho pioneiro em relação à criopreservação de leveduras do gênero Malassezia, sem utilização de substâncias criopreservativas metodologia que permitiu a viabilidade de todas as amostras utilizadas. Este trabalho permitiu a identificação da espécie prevalente no ano de 2004 e a verificação do tempo de viabilidade das amostras congeladas.

Instituição de Fomento: Instituto Nacional de Pesquisas da Amazônia - INPA

Palavras-chave: Malassezia spp., criopreservaçao, identificação.