61ª Reunião Anual da SBPC

C. Ciências Biológicas - 10. Microbiologia - 3. Microbiologia

TRICHOPHYTON RUBRUM: MANUTENÇÃO E VIABILIDADE POR CRIO E HIDROPRESERVAÇÃO

Renan Mori Rocha 1 José Augusto Almendros de Oliveira 1 Ana Cláudia Alves Cortez 1

1. Instituto Nacional de Pesquisas na Amazônia - INPA

INTRODUÇÃO:

Na microbiologia os fungos têm grande importância, pois acometem todos os seres vivos, atuando como importantes agentes das infecções conhecidas como micoses. Através da medicina e da indústria, lhes são agregados grande importância devido à produção de metabólitos, no desenvolvimento e produção de medicamentos, drogas, fermentos, corantes e conservantes, e também como agentes de controle biológico. Para que os fungos possam ser utilizados em pesquisas é necessário conservá-los e assim, técnicas de conservação foram desenvolvidas sendo todas, alternativas plausíveis para a manutenção fúngica, embora os resultados sejam variados. Um representante fúngico é o Trichophyton rubrum, pertencente à família Moniliaceae, é um fungo queratinofílico, filamentoso, antropofílico que utiliza a queratina da camada córnea da pele, unhas e cabelos como nutriente. Dissemina-se por contato através de artroconídios. No Laboratório de Micologia Médica do INPA aplicam-se técnicas para aumentar o tempo de conservação e a viabilidade do T. rubrum, para posteriores estudos utilizando o método de criopreservação a -70°C e de hidropreservação.

METODOLOGIA:

Criopreservação a -70ºC utilizando água peptonada (Pell & Sneath, 1991): colocou-se de 20 a 30 miçangas em microtubos com tampas rosqueáveis para esterilizar em autoclave. Posteriormente colocou-se uma alçada fúngica no microtubo e levou-se ao agitador vortex, em seguida adicionou-se 200L de água peptonada. Identificou-se com número da cepa. Acondicionaram-se os tubos em caixa de papelão e identificou-se a mesma quanto à data de congelamento, gênero e espécie do fungo. Congelou-se em equipamento adequado a -70ºC. Na conservação utilizando água destilada esterilizada: repicaram-se as amostras de T. rubrum em placas de petri contendo meio Agar batata, e incubar a temperatura ambiente, até apresentarem bom crescimento (5-10 dias). Cortar pela margem da colônia jovem, blocos de aproximadamente 6 a 8 mm. Transferir 10 blocos para frasco de penicilina contendo 5 mL de água destilada, esterilizada em autoclave. Obturou-se com tampa de borracha e selo de alumínio e armazenou-se a temperatura ambiente. Verificou-se a viabilidade das amostras 3 vezes durante 12 meses, transferindo-se uma miçanga (criopreservação) e/ou um cubo de meio sólido (hidropreservação) para tubos contendo meios de cultivo sólidos específicos, a fim der promover a recuperação da amostra.

RESULTADOS:

Criopreservação: Todas as 47 cepas de T. rubrum do ano de 2007 mantidas na Coleção de Microrganismo do Instituto Nacional de Pesquisas da Amazônia – INPA, foram recuperadas após 3 meses de conservação a -70ºC. Já as cepas obtidas nos anos de 1992 a 2006 equivalentes a 141 amostras mantidas -70ºC, não apresentaram resultados satisfatórios quanto à viabilidade das cepas, pois houve desenvolvimento de apenas 8% das amostras. Quanto à hidropreservação: Todas as 188 cepas de T. rubrum, obtidas nos anos de 1992 a 2007, preservados em água destilada esterilizada apresentaram-se viáveis. Entretanto, 25 (12,7%) desenvolveram-se contaminadas.

CONCLUSÃO:

Este trabalho mostrou que a conservação a baixas temperaturas sem o uso de criopreservantes apresentou resultados satisfatórios para o Trichophyton rubrum em 12 meses de preservação, reduzindo seu pleomorfismo, como também os níveis de contaminação, sobrepondo-se assim, ao método de hidropreservação.

Instituição de Fomento: Fundação de Amparo a Pesquisa do Estado do Amazonas

Palavras-chave: Trichophyton rubrum, manutenção, viabilidade.