61ª Reunião Anual da SBPC
C. Ciências Biológicas - 10. Microbiologia - 2. Microbiologia Aplicada
Caracterização Clássica e Molecular de 50 Amostras de Shigella Isoladas no Período de 2007 a 2008 na Cidade de Manaus AM.
Paula Taquita Serra 1, 2
Dayane Martins Barbosa Serfaty 1, 2
Raquel Oliveira Pessôa 1, 2
Patrícia Puccinelli Orlandi 1
1. Fiocruz - Instituto Leônidas e Maria Deane
2. Universidade do Estado do Amazonas - UEA
INTRODUÇÃO:

A doença diarréica destaca-se como uma das principais causas de mortalidade infantil, particularmente em países em desenvolvimento. Entre os agentes bacterianos da diarréia aguda, merece destaque, pela prevalência e gravidade do quadro clínico, a Shigella sp. O diagnóstico da infecção intestinal causada por Shigella é feito pelo isolamento dos microorganismos em meios de cultura seletivos seguido de identificação bioquímica e reações de aglutinação com anti-soros específicos.  Um dos testes de moleculares mais utilizados para a identificação de Shigella é a amplificação por PCR do gene ipaH que é responsável por uma proteína localizada no flagelo e que está presente em todas as espécies de Shigella. Diante do exposto, pretendemos investigar a prevalência dos sorotipos de Shigella em crianças com diarréia aguda atendidas em Manaus, detectando os fatores de virulência e avaliando os dados clínicos e epidemiológicos associados a este patógeno. A identificação precisa dos agentes etiológicos resulta ser o principal marcador epidemiológico para a realização de uma vigilância epidemiológica moderna. Da mesma forma, este mesmo conhecimento orientará as ações a serem adotadas para controlar as fontes de infecção e interromper as vias de transmissão.

METODOLOGIA:

Foram coletadas 1.500 amostras de fezes de crianças com diarréia que deram entrada nos Hospitais infantis da Zona Leste, Zona Sul e Zona Oeste da cidade de Manaus. As amostras foram submetidas a identificação bioquímica e as colônias não fermentadoras de lactose foram reisoladas nos meios específicos para Shigella: Ágar SS e XLD. Em seguida, foram realizados testes bioquímicos, utilizando Citrato, TSI, EPM e Mili.

As colônias bacterianas  sugestivas de Shigella foram ressuspensas da superfície do meio EPM, com 0,3 ml de solução salina (0,85% - p/v) e submetidas ao teste de aglutinação em lâmina com os anti-soros polivalentes espécie – específicos procedentes da Probac do Brasil.

A pesquisa dos genes de virulência foi realizada através da reação de PCR. Os primers utilizados foram ipaH e Einv. Para cada reação de amplificação foram empregados 1U da enzima Taq polimerase; 01 mM de dNTPs (dATP, dCTP,dGTP e dTTP); tampão de amostra (10mM Tris HCL, pH 8,3; 50mM KCL); 10pMol de cada primer 1,5 – 3,0 mM de MgCl2  e 2,5 μl da solução de DNA, diluídos em tampão adequado.

RESULTADOS:

Das 1500 amostras coletadas, 8.6% foram positivas para Shigella. Foi observado que a incidência de pacientes apresentando diarréia por Shigella sp é maior até os 24 meses sendo que os sinais e sintomas  por ordem de maior freqüência foram: febre, vômito e desidratação. Com relação ao sangue oculto,  foi observado que 50% das amostras foram positivas.

Os bairros da Zona Leste da cidade, representaram 45 %, seguidos por 33% da Zona Sul e 11% das Zonas Oeste e Norte, respectivamente.

Em relação ao abastecimento de água, 49% das casas possuem água encanada, 47% água de poço e os 4% restantes recebem água do rio. Em relação a água utilizada para o consumo; 53% da água de consumo provem dos poços,13% filtrada, 11% mineral, 9% diretamente da torneira, 7% fervida, 5% do rio e 2% de água do rio com água sanitária.

Das amostras isoladas, 50 foram submetidas à técnica de PCR para a detecção dos genes IpaH e Einv. Todas as amostras testadas mostraram-se positivas para a presença dos dois genes confirmando os resultados obtidos durante a identificação bioquímica.

Os testes sorológicos mostraram a Shigella flexneri sendo a mais freqüente (32%) seguida pela S. sonnei (26%), S. dysenteriae (14%) e S. boydii (8%). Do total de 50 amostras, 10 (20%) não tipadas.

CONCLUSÃO:

Segundo a literatura, Shigella é um dos patógenos que estão relacionados aos problemas de saneamento básico. Pensando nisto, podemos elucubrar a respeito das porcentagens próximas em relação à água encanada e água de poço. Porque não haveria maiores diferenças entre elas? Talvez pelo fato da cidade não possuir um sistema de tratamento de água adequado e ou por existir uma contaminação entre os poços e as fossas que estão localizados próximos sem as medidas corretas por falta de fiscalização. Isto, juntando-se ao fato de que a maior parte dos casos encontra-se entre moradores da Zona Leste, onde os bairros são, em sua maioria, provenientes de invasões, pode levar a conclusão que exista falta de informação em relação ao melhor tratamento que se deve ter em relação à água.

Os resultados obtidos com o teste sorológico condizem com o observado nas demais localidades do Brasil, com a predominância de Shigella flexneri. No entanto trabalhos anteriores realizados em Rondônia, mostrou a grande prevalência da S. sonnei, principalmente na região Norte, o que se confirmou neste trabalho, sendo esta a segunda mais frequentemente encontrada.

O que chama atenção neste trabalho é a alta incidência de S. dysenteriae, já que em trabalhos anteriores, nenhuma amostra foi isolada na região Amazônica.

Instituição de Fomento: FAPEAM, CNPQ
Palavras-chave: Shigella, Diarréia Infantil, Amazônia.