Variações ambientais na temperatura e oxigênio da água contribuíram para ocorrência de diversas características adaptáveis na evolução dos peixes amazônicos. A enzima Lactato Desidrogenase (LDH, EC: 1.1.1.27) vem sendo utilizada em várias pesquisas com peixes, por está diretamente ligada à via glicolítica e ao metabolismo anaeróbico, responsável por respostas ao estresse ambiental. Ela catalisa a transformação reversível do piruvato a lactato no final da via glicolítica quando da ausência de oxigênio, com suporte coenzimático do sistema NAD⁺/NADH⁺ e possui diferentes isoenzimas que são distribuídas de acordo com necessidades energéticas de cada tecido ou órgão, disponibilidade de oxigênio e suas funções fisiológicas. A LDH-A é expressa em tecidos anaeróbicos, como o músculo esquelético; a LDH-B em tecidos aeróbicos como fígado e coração; e a LDH-C principalmente na retina e cérebro em espécies de teleósteos avançados. No presente trabalho, pretende-se analisar a amplificação dos genes de LDH e padronizar a metodologia para o estudo das relações filogenéticas das isoenzimas entre diversas espécies de peixes amazônicos, e assim obter mais informações dos processos da evolução molecular de genes duplicados e seu papel no metabolismo das espécies e adaptação a ambientes variáveis

Os procedimentos de extração de DNA genômico foram realizados a partir das amostras de músculo de 23 espécies de peixes amazônicos das ordens Clupeiformes, Osteoglossiformes, Characiformes, Gimnotiformes, Siluriformes e Perciformes utilizando-se o protocolo de “Wizard Genomic DNA Purification Kit” (Promega Corporation). A avaliação da integridade do DNA genômico foi feita por eletroforese em gel de agarose 1% (m/v) corado com brometo de etídio (0,5 µg/mL) em solução tampão TAE 1X (Tampão Tris-Acetate - Tris 40mM, Acido Acético 20mM, EDTA 1mM) e visualização em luz UV. As amplificações dos genes de LDH foram feitas por reação de polimerização em cadeia (PCR) utilizando DNA de todas as espécies, com três pares de primers degenerados de LDH (LDH-A, LDH-B e LDH-C). Para a clonagem, os fragmentos de interesse foram inseridos no Vetor de clonagem pGEM-T easy seguindo protocolo de Sambrook, et.al. (2001) para transformação bacteriana, bem como a extração do DNA plasmidial. O sequenciamento dos fragmentos de interesse está sendo realizado em Sequenciador de DNA ABI 3130 por meio da reação de sequenciamento, utilizando-se Big Dye^R Terminator V3.1 Cycle Sequencing Kit. As sequências obtidas estão sendo analisadas pelo banco de dados The National Center for Biotechnology Information.

Inúmeros autores têm optado por peixes como um grupo para estudar a evolução das isoenzimas de LDH. Eles ocupam uma posição importante na filogenia dos vertebrados, com espécies muito primitivas (menos especializadas) e avançadas (altamente especializadas). Além disso, os peixes demonstram uma infinidade de padrões adaptativos e evolutivos, ocorrendo em todos os níveis biológicos. Por sua plasticidade genômica e diversidade de espécies os peixes favorecem os estudos evolutivos. No presente estudo, resultados eletroforéticos mostraram que as amostras de músculo de 23 espécies, de todas as ordens, amplificaram a izoenzima LDH-A; já a LDH-B não amplificou em uma espécie de Siluriformes e a LDH-C foi amplificada em uma espécie de Clupeiformes, três de Characiformes, quatro de Siluriformes e duas de Perciformes. Para cada espécie observou-se diferenças no que diz respeito às quantidades de bandas e pesos moleculares. Sequências de três espécies foram obtidas a partir de fragmentos de LDH-A e B, mostrando partes bastante conservadas.