61ª Reunião Anual da SBPC

C. Ciências Biológicas - 3. Bioquímica - 1. Biologia Molecular

EXPRESSÃO DIFERENCIAL DE PROTÉINAS DO CARDINAL (Paracheirodon axelrodo) EXPOSTO A ESTRESSE AMBIENTAL DE POLUIÇÃO POR COBRE.

William Ramos Ferreira 1 Natalia Melo Soares 1 Andréa Araújo de Sousa 1 Rubens Tomio Honda 1

1. Centro Universitário Nilton Lins

INTRODUÇÃO:

O crescimento desordenado das áreas urbanas e industriais de Manaus vem causando efeitos negativos na biota aquática do entorno da cidade. No ambiente aquático (rios ou igarapés) os efluentes urbanos e industriais produzidos afetam principalmente os organismos aquáticos, podendo modificar aspectos comportamentais, afetar órgãos e consequentemente causar alterações nas estruturas de populações e comunidades (Fearnside , 2003, Northingtons and Hershey, 2006). Um dos metais comumente encontrados nos efluentes é o cobre. Embora o cobres seja um dos elementos traços essenciais, em concentrações elevadas este metal é altamente tóxico (Tao, 1999). Sendo assim, este trabalho tem como objetivo analisar o perfil de expressão diferencial de proteínas do cardinal visando a busca de moléculas específicas que possam servir de indicadoras de poluição ou contaminação por cobre.

METODOLOGIA:

Os animais foram adquiridos a partir de empresas especializadas em exportação de peixes ornamentais localizado nas mediações da cidade de Manaus. A análise de expressão diferencial de proteínas foi realizada a partir da amostra do homogeneizado da cabeça do cardinal (Paracheirodon axelrodi) previamente expostos a presença de subletal do cobre. A separação das proteínas foram realizadas por meio de Eletroforese 2-D. A primeira dimensão (iso eletrofocalização) foi realizada com auxílio de equipamento Ettan IPGPhor III (Ge) com “strips” de 7cm e pH entre 4-7. O perfil do programa utilizado para a separação foi de 12hrs de hidratação; 150V por 10’; 500V por 1h; 1000V por 1h e 8000V por 4h. Antes da separação eletroforética a quantificação das proteínas foram realizadas com o 2-D QUANTI KIT (Amersham Biosciences). A segunda separação foi realizada em cuba de eletroforese Rubby 600 (Ge) a 30mA/gel durante 4 h. Após a separação bidimensional os géis foram fixados em solução contendo etanol e ácido acético e a coloração dos géis foram realizadas em solução contendo Coomassie Brilliant Blue. Os géis foram digitalizados com auxílio de scanner modelo M1005 (HP) e os “spots” expressos foram identificados e removidos para análise em espectrômetro de massa.

RESULTADOS:

As análises dos géis de eletroforese sugerem que houve diferença no perfil de expressão de proteínas presente na cabeça entre cardinais expostos e não expostos a presença de cobre.

CONCLUSÃO:

As proteínas expressas na cabeça do cardinal expostos e não expostos ao cobre representam um potencial para análise de moléculas bioindicadores de poluição por cobre. As proteínas que deixaram de expressar quando os cardinais foram submetidos a presença de cobre provavelmente estão relacionadas a supressão de algumas atividades metabólicas. Portanto, o estudo da expressão diferencial de proteínas como bioindicadoras de poluição deve se levar em conta também a supressão da expressão de algumas proteínas e não somente a expressão de determinada proteína específica.

Instituição de Fomento: FAPEAM , CNPq, FUNDAÇÃO NILTON LINS

Palavras-chave: Expressão Protéica, Cobre, Paracheirodon axelrodi.