61ª Reunião Anual da SBPC

B. Engenharias - 1. Engenharia - 12. Engenharia Química

SELEÇÃO DE FUNGOS AMAZÔNICOS PRODUTORES DE LACASE

Andréa Campos Barros ¹
Fabrícia Farias de Menezes ¹
Sandra Patricia Zanotto ²
Sergio Duvoisin Jr. ^{1, 2}
Patrícia Melchionna Albuquerque ^{1, 2}

1. Universidade do Estado do Amazonas - Escola Superior de Tecnologia
2. Universidade do Estado do Amazonas - PPG em Biotecnologia e Recursos Naturais

INTRODUÇÃO:

O interesse industrial por novas fontes de enzimas utilizadas em processos de baixo impacto ambiental, como a biocátalise, tem contribuído para o desenvolvimento de estudos envolvendo a triagem de microorganismos. O potencial sintético dos fungos é bastante conhecido, pois produzem enzimas que possuem larga aplicação industrial, e os ecossistemas Amazônicos têm importância estratégica nesse aspecto, configurando-se numa fonte praticamente inesgotável destes microrganismos para aplicações biotecnológicas. Devido à capacidade de catalisar a oxidação de fenóis e outros compostos aromáticos, e por apresentarem baixa especificidade por substratos, as lacases têm sido utilizadas em diversos processos, como remoção de lignina de polpas kraft em indústrias de papel e celulose, remoção de xenobióticos de cursos d'água, análise de drogas, remoção de compostos fenólicos de vinho, clarificação de corantes e efluentes, entre muitos outros. Dessa forma, o objetivo deste trabalho foi avaliar o potencial de fungos amazônicos na produção de lacases. Para tanto, foram comparados dois meios de cultivo a fim de verificar a influência da adição de cobre na produção enzimática dos fungos.

METODOLOGIA:

Primeiramente foi realizado um ensaio qualitativo em placa de petri contendo ácido tânico (teste de Banvedamm), a fim de selecionar fungos pertencentes à Coleção Fungi da UEA produtores de fenoloxidases. Cinco fungos degradadores de madeira que apresentaram resultado positivo no teste de Banvedamm foram selecionados para a avaliação quantitativa da atividade de lacase (UEA_094, UEA_097, UEA_105, UEA_115 e UEA_143). Os fungos foram mantidos em meio BDA (ágar-batata-dextrose) a 4°C. Para o preparo do inóculo, os fungos foram repicados novamente para o meio BDA e incubados a 28°C em estufa durante 5 dias. Discos do meio BDA foram inoculados em dois meios de cultivo líquido. O meio 1 (M1) continha extrato de malte, glicose, peptona e CuSO₄; e o meio 2 (M2) apenas extrato de malte e glicose. O crescimento foi realizado em incubadora a 28°C e 180 rpm por 30 dias. Alíquotas foram retiradas periodicamente para a dosagem da atividade enzimática, utilizando técnica colorimétrica. A atividade da lacase foi determinada em espectrofotômetro verificando o aumento da absorbância a 530 nm em função da oxidação da siringaldazina. Um isolado do gênero Trametes (conhecido produtor de lacases) também foi cultivado, a fim de comparar com o desempenho dos fungos Amazônicos.

RESULTADOS:

O meio M1 (com CuSO₄) favoreceu a produção de lacase em quatro dos isolados degradadores de madeira avaliados, onde maiores atividades enzimáticas foram observadas, em r elação ao cultivo em meio M2. Este resultado indica a importância da adição de cobre no meio de cultivo a fim de induzir a produção de lacase nos fungos Amazônicos testados, o que já era esperado visto que as lacases possuem cobre em seu sítio ativo. Os fungos UEA_097 e UEA_143 apresentaram as mais baixas atividades enzimáticas quando comparados aos outros fungos. Entretanto, os isolados UEA_094 e UEA_105 apresentaram atividade de lacase superior à do fungo Trametes quando cultivados em meio M1 e em meio M2, evidenciando o grande potencial destas cepas como produtoras de lacases. O fungo UEA_105 apresentou melhor desempenho que os outros isolados quando cultivado em M1, e o isolado UEA_094 produziu mais da enzima de interesse quando cultivado em meio M2. O fungo UEA_115 apresentou produção enzimática semelhante à do Trametes, o que também é um resultado promissor.

CONCLUSÃO:

Os resultados obtidos com estes experimentos indicam o grande potencial dos fungos Amazônicos degradadores de madeira UEA_094 e UEA_105 como produtores de lacase. Estes isolados apresentaram maior atividade enzimática que o fungo Trametes, conhecido produtor desta enzima. O estudo da quantidade de cobre adicionado ao meio de cultivo deverá ser realizado a fim de buscar condições ótimas para a produção de lacase por estas cepas.

Instituição de Fomento: Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado do Amazonas

Palavras-chave: lacase, fungos amazônicos, atividade enzimática.