61ª Reunião Anual da SBPC

C. Ciências Biológicas - 8. Genética - 2. Genética de Microorganismos

OBTENÇÃO DE DNA DOS MICROORGANISMO RESISTENTES À ALTA CONCENTRAÇÃO DE COBRE, COLETADOS DO CHORUME DO ATERRO SANITÁRIO DE MANAUS

LORENA LIMA DE AGUIAR 1 SÉRGIO RICARDO NOZAWA 1

1. Centro Universitário Nilton Lins/CUNL

INTRODUÇÃO:

O cobre (Cu) pertence aos elementos de transição, onde sua forma mais comum é o cátion. Tem ocorrência relativamente alta na crosta terrestre, porém nos seres vivos pode ser benéfico ou maléfico, dependendo de sua concentração. Altas concentrações de cobre podem causar sérios danos ao cérebro humano, cansando várias patologias, dentre elas a Doença de Wilson, além de ser danosa a flora, já que um numero limitado de espécies sobrevivem em meio a essas condições. De modo geral, onde há exploração de cobre, normalmente os índices desse elemento é bastante alto, indicando, portanto, terreno contaminado. Na Amazônia, por exemplo, já foi detectado indício de contaminação considerado crítico. Existe uma gama de microorganismos ainda não estudados que tem a capacidade de adaptar-se aos mais adversos meios, como bactérias que estão presentes em locais contaminados pelo cobre. Este trabalho tem como objetivo identificá-los para posteriormente disponibilizá-los para a sociedade, sugerindo dessa forma uma nova opção para o tratamento adequado de locais contaminados.

METODOLOGIA:

Foi realizada homogeinização da amostra de microorganismo proliferado em meio de cultura sólido 2XYT à pH7 e 37 oC coletado do Aterro Sanitário de Manaus exposta primeiramente 100 µL de cobre na concentração de 1g/L e posteriormente acrescentando-se 100 µL nas amostras seguintes, até atingir 300 µL na concentração de 1g/L em 10 mL de meio de cultura líquido 2XYT e adicionou-se mais 300 µL do metal a mesma concentração, incubando-a no shaker à 37 oC por 24 horas. Após a incubação foram feitas 4 amostras (1mL de solução para cada uma) de extração de DNA genômico. Posteriormente, eletroforese em gel de agarose de 5 µL do DNA obtido de cada amostra. Na sequência, todas as amostras foram quantificadas para ser realizada amplificação do gene por PCR com oligonucleotídeos iniciadores para os genes 16S rDNA bacteriano usando 10 µL de template, master mix GoTaq® Green Master Mix, da Promega e 1,0 µL de primers 16SF e 16SR. Outra eletroforese foi realizada sobresaindo-se a amostras 2 e 4 a partir da qual foi feita a purificação do DNA nela contido usando o Kit Wizard® SV Gel and PCR Clan-Up System e então uma nova quantificação.

RESULTADOS:

O rápido crescimento de microorganismos foi evidenciada através da alta taxa de proliferação dos mesmos em placas contendo 20 ml de meio de cultura solido 2XYT, onde foi acrescentada 300 µL de cobre na concentração de 1g/L . Esses microorganismos já haviam sido selecionados por terem resistido ao aumento de 100 em 100 µL de cobre até a quantidade máxima de 300 µL, diluído a meio de cultura líquido 2XYT. A partir da extração de DNA do microrganismo cultivado em meio líquido, em 4 amostras, observou-se que existia uma concentração do material genético pela eletroforese em gel de agarose, a qual foi confirmada após quantificação obtendo como resultado uma concentração de DNA igual a: 6,9 ng/ µL, 13,1 ng/ µL, 6,6 ng/ µL e 19,2 ng/ µL nas amostras 1, 2, 3 e 4 respectivamente, mostrando que existem microrganismos no Aterro Sanitário de Manaus resistentes à alta concentração de cobre.

CONCLUSÃO:

Avaliando o resultado obtido pode-se inferir que no chorume do Aterro Sanitário de Manaus existem microrganismos resistentes à altas concentrações de cobre e que o seu crescimento frente a esta adversidade ambiental não é alterada. Pode-se projetar trabalhos futuros para otimizar a utilização desses microrganismos, após sua caracterização e disponibilidade no banco de dados das sequências de DNA. Certamente esta alternativa de recuperação de meios contaminados, revolucionaria o processo de revitalização até então utilizado hoje em dia.

Instituição de Fomento: PAIC/FAPEAM

Palavras-chave: cobre, biologia molecular, extração de DNA.