61ª Reunião Anual da SBPC

C. Ciências Biológicas - 10. Microbiologia - 1. Biologia e Fisiologia dos Microorganismos

ESPECIES DE PENICILLUIM E ASPERGILLUS PRESERVADOS SOB ÓLEO MINERAL E PELO MÉTODO DE CASTELLANI NA COLEÇÃO DE FUNGOS DA AMAZÔNIA -ILMD/FIOCRUZ-AMAZÔNIA: VIABILIDADE E AUTENTICAÇÃO TAXONÔMICA

Josy Caldas da Silva 1 Ormezinda Celeste Cristo Fernandes 1

1. Centro de Pesquisas Leônidas & Maria Deane- CPqL&MD/ FIOCRUZ

INTRODUÇÃO:

Dentre as coleções brasileiras de microrganismos, a Coleção Biológica do Centro de Pesquisa Leônidas e Maria Deane – CBCPqLMD, constitui- se em um patrimônio de significância científica por tratar-se de um acervo no qual estão preservados microrganismos da Amazônia. Entre esses, no acervo, estão preservados fungos filamentosos, leveduras e bactérias, isoladas dos mais diversos substratos da região Amazônica. A manutenção de microrganismos em coleções de culturas tornou-se de fundamental importância para estudos retrospectivos e prospectivos, que enfoque a biologia, etiologia e aspectos epidemiológicos. Entretanto, para uma satisfatória análise fenotípica e genotípica, a longo prazo, é necessária a escolha adequada do método de preservação (GIRÃO et al., 2004; NAKASONE; PETERSON; JONG, 2004; MORGAN et al., 2006). Entretanto o método a ser adotado depende da espécie a ser preservada e dos recursos que dispõem na coleção (LIMA; BORBA, 2001). Desta forma este trabalho teve como objetivo verificar a pureza, autenticidade e a viabilidade fisiológica dos fungos filamentosos para modernização dos métodos de preservação pertencentes a Coleção de Fungos da Amazônia- CFAM.

METODOLOGIA:

Foram reativadas 300 culturas fúngicas filamentosas mantidas em água destilada esterilizada (n=150) e óleo mineral (n=150), em tubo de ensaio contendo Ágar Extrato de Levedura Czapek (CYA) e/ou Caldo Glicosado (CG) de acordo com as características de cada espécie. Os cultivos foram mantidos a 25 oC por sete dias. Para confirmação das características macroscópicas e microscópicas, fragmento de cultura dos fungos filamentosos crescidas pura em meio específico foram repicados para Ágar Extrato de Malte (MEA), Ágar Glicerol Nitrato 25% (p/v) [G25N], Ágar Extrato de Levedura Czapek (CYA) e Ágar Czapek (CZ) de acordo com as características de cada espécie, em placa de Petri (90 mm x 15 mm), mantendo-se os cultivos a 25 oC, durante sete dias. As microestruturas foram observadas em lâmina obtidas por microcultivo. Para o reconhecimento em nível de espécie foram utilizadas literaturas especializadas. As culturas autenticadas foram conservadas em quatro métodos distintos: água destilada esterilizada, óleo mineral, liofilização e por congelamento a -20 oC (CASTELLANI, 1939; SHERF,1943; RAPER; ALEXANDER, 1945; SIMIONE, 2004).

RESULTADOS:

Do total de preservadas em água destilada esterilizada, 87,0% e 96,7% de óleo mineral demonstraram crescimento quando subcultivadas em CYA, respectivamente. Aquelas que não foram recuperadas oriundas da preservação de água destilada totalizaram em 13,0%, e as de óleo mineral 3,3%, entre as preservadas por oito anos. Todas as culturas reativadas foram autenticadas em nível de espécie, uma vez que, algumas encontravam-se identificadas somente em nível de gênero. A análise das culturas viáveis (84%) obtidos em CYA, MEA e G25N e dos microcultivos demonstraram as características peculiares dos gêneros estudados (Penicillium e Aspergillus), fundamentando-se na taxa de crescimento, na morfologia da colônia, das microestruturas e demais caracteres comparados à chave de classificação proposta por metodologia especializada. Estes dados corroboram com os obtidos por outros autores (SILVA et al., 2008; DIOGO; SARPIERI; PIRES, 2005; DESHMUKH, 2003; BRILHANTE, 2002; BORBA; RODRIGUES, 2000) nos estudos realizados com fungos anamorfos preservados sob água destilada e óleo mineral, onde verificaram que estes foram métodos eficientes na manutenção da viabilidade e preservação das características morfofisiológicas dos Penicillium e Aspergillus.

CONCLUSÃO:

Comprovou-se que os métodos de preservação estudados são eficientes para garantir a viabilidade, pureza e autenticidade das culturas filamentosas preservadas em água destilada esterilizada e óleo mineral durante largos períodos de tempo.

Instituição de Fomento: Centro de Pesquisas Leônidas & Maria Deane- CPqL&MD/ FIOCRUZ

Palavras-chave: Coleção de cultura, Viabilidade celular, Conservação de fungo.