61ª Reunião Anual da SBPC
C. Ciências Biológicas - 2. Biologia - 3. Biologia Geral
TRIAGEM DE FUNGOS AMAZÔNICOS PRODUTORES DE LIPASES COM ATIVIDADE SINTÉTICA EM MEIO ORGÂNICO PARA APLICAÇÃO EM BIOCATÁLISE
Israel Paes Romano 1
Fabiana de Aragão Lima 1
Soraya Félix da Silva 1
Sandra Patrícia Zanotto 1
Patrícia Melchionna Albuquerque 1
Sérgio Duvoisin Jr 1
1. Laboratório de Biorgânica do MBT - Universidade do Estado do Amazonas (UEA)
INTRODUÇÃO:

Reações biocatalisadas por lipases (esterificação e transesterificação) em meio orgânico são usadas como uma excelente ferramenta na síntese de importantes produtos, tais como ésteres aromáticos, monoacilglicerois, blocos de construção quiral, biodiesel, entre outros. Merece destaque especial a utilização de lipases para obtenção de fármacos em suas formas enantiomericamente ativas e na resolução de álcoois. Neste trabalho, fungos isolados da flora amazônica foram avaliados quanto à produção de lipases ligadas ao micélio com atividade sintética em meio orgânico, como parâmetro inicial para avaliar seu potencial de aplicação em biocatálise. Os fungos foram utilizados como biocatalisadores em reações de esterificação (síntese de oleato de pentila e de linoleato de dodecila), e transesterificação (síntese do palmitato de etila) e de resolução de álcool (acetilação enantiosseletiva do 2-octanol).

METODOLOGIA:

Foram selecionados aleatoriamente cinqüenta e dois isolados fúngicos do Laboratório de Biorgânica da UEA para a triagem da atividade sintética em meio orgânico. Os isolados foram primeiro cultivados em meio líquido e incubados por 9 dias em agitador orbital (200 rpm), para crescimento da massa micelial. Os micélios foram coletados, lavados, dessecados e triturados a pó. Foram pesadas alíquotas de 50 mg do micélio de cada isolado fúngico, as quais foram suspensas em 10 mL das seguintes soluções em meio hexano:  ácido oleico e n-pentanol (50 mM:250 mM); ácido linoleico e n-dodecanol (50 mM:50 mM);  palmitato de p-nitrofenila (1,25 mM) com adição de 50 μL de etanol (1,5 M).  As suspensões foram incubadas por 72 horas em agitador termoestatizado, 150 rpm e 28 ºC. Alíquotas foram retiradas após 72 h e os percentuais de conversão de cada reação foram obtidas por HPLC, utilizando-se a enzima comercial Novozym 435 como padrão (100 % de conversão). Os fungos que obtiveram os percentuais de conversão mais altos foram novamente cultivados em meio sintético e empregou-se 50 mg de sua massa micelial na acetilação do (R,S)-2-octanol (2 mmoles) com acetato de vinila (6 mmoles) em 20 mL de hexano. Alíquotas foram retiradas após 120 hs e os percentuais de conversão foram obtidos por CGMS.

RESULTADOS:

Dos 52 isolados testados, 9 obtiveram percentuais de conversão acima de 30 % em pelo menos uma das três reações de triagem da atividade sintética, sendo os isolados UEA_007 e UEA_115 os que obtiveram os valores mais altos (98% e 94%, respectivamente,  na síntese do linoleato de dodecila) e foram por isso selecionados para utilização na reação de resolução do 2-octanol. Dentre estes 9, o isolado UEA_115 mostrou-se o mais versátil, pois além apresentar bom desempenho nas reações de esterificação, mostrou  boa capacidade para a resolução do (R,S)-2-octanol (ees 29%; eep 99%; c 22%; E > 200)

CONCLUSÃO:

Isolados fúngicos de plantas da região amazônica avaliados neste trabalho apresentaram grande potencial como fornecedores de lipases para aplicação em biocatálise. Comparando a atuação destes isolados na triagem de atividade sintética com a atuação enzima comercial Novozym 435, as cepas UEA_007 e UEA_115 chegaram muito perto do percentual de conversão do padrão de referência na síntese de linoleato de dodecila. A cepa UEA_115 também mostrou-se promissora para utilização na resolução de álcoois racêmicos. No futuro deverão ser realizados testes adicionais a fim de confirmar o potencial de aplicação biotecnológica das lipases produzidas por estes fungos.

Instituição de Fomento: Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado do Amazonas - FAPEAM
Palavras-chave: Biocatálise, Lipase, Fungos da Amazônia.