61ª Reunião Anual da SBPC
C. Ciências Biológicas - 10. Microbiologia - 3. Microbiologia
DETERMINAÇÃO DA ATIVIDADE ENZIMÁTICA EXTRACELULAR DE ISOLADOS DE Candida  DA CAVIDADE ORAL DE PESSOAS RESIDENTES EM MANAUS/AM
Renata Gualberto 1
Shirley Araújo-Passos 1
Ani Jackisch-Matsuura 1
1. Instituto de Pesquisa Leônidas e Maria Deane – Fiocruz/AM
INTRODUÇÃO:

A levedura Candida albicans vive em comensalismo com indivíduos saudáveis, mas é capaz de causar infecções se houverem fatores predisponentes. A candidíase oral pode ser causada por várias espécies de Candida, entre elas, C. albicans, C. tropicalis, C. glabrata, C. krusei e C. parapsilosis, onde a habilidade em produzir enzimas hidrolíticas como fosfolipase e proteinase é considerada importante fator patogênico, pois estas atuam intensificando o processo de adesão. Tem aumentado mundialmente o interesse na vigilância e no monitoramento da candidíase, considerando que este é o 4º microrganismo mais freqüente nas infecções hospitalares. Faz-se necessário ampliar os conhecimentos sobre Candida, já que está havendo um aumento das espécies de C. não-albicans causando candidíase e as espécies respondendo de forma diferente aos antifúngicos. O estudo para determinar a virulência das espécies de Candida isoladas da cavidade oral na cidade de Manaus irá contribuir para indicar modelos mais eficazes de tratamento da candidíase na nossa região.O objetivo deste trabalho foi caracterizar quanto à virulência espécies de Candida isoladas da cavidade oral de pessoas residentes em Manaus/AM, através da determinação da produção das enzimas fosfolipase e proteinase.

METODOLOGIA:

Foram testadas 319 amostras de Candida [C. albicans (260), C. parapsilosis (31), C. tropicalis (15),  C. krusei (6), C. kefyr (4), C. dubliniensis (2) e C. glabrata (1)] isoladas de 145 pessoas com e sem candidíase oral. Para determinar a produção de fosfolipase, culturas com 24h de crescimento em ágar Sabouraud Dextrose foram inoculadas em placas com meio base mais emulsão de ovo a 50% em solução fisiológica. Foram inoculados 10µL de uma suspensão de células ajustada na escala 1 McFarland. A leitura do teste foi realizada após 4 dias de incubação a 37ºC, sendo considerado como positivo a produção de zona opaca de precipitação ao redor da colônia. Para determinar a produção de proteinase as leveduras foram cultivadas por 24h em ágar Sabouraud Dextrose e inoculadas em placas com ágar BSA (Bovine Serum Albumin). A padronização do inóculo foi feita conforme descrito para o teste de produção de fosfolipase. A leitura do teste foi realizada após 7 dias de incubação a 37ºC, sendo considerado como positivo a produção de halo transparente ao redor da colônia. A atividade enzimática (Pz) foi medida através da razão entre o diâmetro da colônia e o diâmetro da colônia mais a zona de precipitação, sendo, Pz= 1 ausência; 0,64 < Pz < 1 positiva e Pz ≤ 0,63 fortemente positiva.

RESULTADOS:

Das amostras analisadas, 117 (36,7%) foram positivas para a produção de fosfolipase, sendo 40 (34,2%) classificadas com atividade fortemente positiva, e 219 (68,6%) amostras positivas para proteinase, com 78 (35,6%) fortemente positivas. Noventa e duas amostras (28,8%) mostraram-se positivas tanto para a produção de fosfolipase quanto para a proteinase. Dentre as 40 amostras de leveduras fortemente positivas para fosfolipase, 36 foram Candida albicans, 2 C. tropicalis, 1 C. parapsilosis e 1 C. glabrata. Para a produção de proteinase, das 78 classificadas como fortemente positivas, 68 amostras foram C. albicans, 6 C. parapsilosis, 3 C. tropicalis e 1 C. dubliniensis. C. krusei e C. kefyr não produziram as enzimas. Nas amostras de C. albicans e C. parapsilosis isoladas de pessoas com sintomas para candidíase verificou-se maior produção de proteinase.

CONCLUSÃO:

Candida albicans é a espécie com maior produção de fosfolipase e proteinase e, entre as Candida não-albicans, são as espécies C. parapsilosis e C. tropicalis. A enzima proteinase foi produzida fortemente em mais amostras de Candida obtidas de pessoas com estomatite por prótese quando comparada a enzima fosfolipase e em comparação a amostras provenientes de pessoas sem sintomas. Esses resultados mostram a importância da enzima proteinase para a instalação da infecção por Candida em pessoas residentes na cidade de Manaus. E, que a maioria das leveduras estudadas tem habilidade de produzir as enzimas, tendo, portanto, importante fator de patogenicidade.

Instituição de Fomento: FAPEAM
Palavras-chave: gênero Candida, cavidade oral, enzimas hidrolíticas .