Atualmente, a doença de Chagas ou tripanossomíase americana ainda representa um grave problema de saúde pública nas Américas, afetando de 8 a 12 milhões de pessoas. Durante sua longa fase crônica, o diagnóstico é feito pela sorologia convencional, que se baseia na detecção de anticorpos que permanecem circulantes por um longo período, gerando, consequentemente, uma alta frequência de resultados falso-positivos após o tratamento. Nesse contexto, a Tc-CRP, uma glicoproteína de 160kDa específica da membrana de tripomastigotas de T. cruzi foi avaliada como antígeno em ensaios de ELISA, apresentando sensibilidade e especificidade ótimas e, portanto, sendo um indicador eficaz de infecção ativa. Contudo, todos os dados gerados até o momento provêm de estudos com a cepa Y de T. cruzi, e como já é bem documentado que este parasito apresenta uma variabilidade genética bastante significativa, vimos ser necessária uma identificação e comparação do gene codificador da Tc-CRP em outras cepas. Assim, este trabalho se propôs a identificar e caracterizar comparativamente o gene da Tc-CRP em cepas de T. cruzi pertencentes aos grupos I, II e 1/2 (híbrido), previamente isoladas e depositadas em um banco de cepas do laboratório de Parasitologia da UFTM.

Inicialmente, foram selecionadas, a partir do banco de cepas da disciplina de Parasitologia da UFTM, 26 cepas de T. cruzi, sendo nove pertencentes ao grupo I, 15 pertencentes ao grupo II, uma classificada como híbrida e outra com genótipo considerado inconclusivo. Posteriormente, foram incluídos no estudo quatro isolados de Trypanosoma cruzi-like provenientes de morcegos capturados na região do Triângulo Mineiro. Para as reações de PCR (Polymerase Chain Reaction) foram desenhados dois pares de iniciadores específicos para o gene da Tc-CRP, denominados CRP1 e CRP2, para amplificarem, respectivamente, os fragmentos correspondentes às regiões C-terminal e N-terminal da proteína. Os fragmentos obtidos foram em seguida submetidos à eletroforese em gel de poliacrilamida (PAGE) 6% e visualizados após revelação com solução de nitrato de prata. Os fragmentos amplificados foram então purificados utilizando-se o Kit Illustra GFX PCR DNA & Gel Band Purification para posterior utilização em ensaios de RFLP (Restriction Fragment Length Polymorphism), nos quais estes fragmentos foram digeridos com as endonucleases ScrFI e MboII. Por fim, o software GelCompar II foi utilizado para análise da proporção de bandas compartilhadas entre as cepas avaliadas e para a construção dos dendogramas.

Podemos concluir que o gene da Tc-CRP está presente em todos os isolados avaliados, reforçando a utilidade desta glicoproteína como antígeno em ensaios de ELISA para diagnóstico e, principalmente, na avaliação da eficácia terapêutica em chagásicos crônicos. O emprego deste método reduziria a ocorrência de resultados falso-positivos em pacientes que não mais apresentam uma infecção ativa, o que o torna bastante promissor. Desse modo, podemos sugerir a utilização de um pool de CRPs, o que aumentaria ainda mais a sensibilidade e especificidade já apresentadas pelo Tc-CRP ELISA, conforme dados anteriores. Além do mais, os dados gerados pelos ensaios de PCR e RFLP nos permitem sugerir a utilização do primer CRP2 como um novo marcador molecular para diferenciar, não só as cepas de T. cruzi em dois grupos principais, mas também outros tripanossomatídeos, no caso o T. cruzi-like e também o T. rangeli, como já pôde ser observado pelo nosso grupo de pesquisadores.