61ª Reunião Anual da SBPC
C. Ciências Biológicas - 10. Microbiologia - 3. Microbiologia
ATIVIDADE "KILLER" DE MICRORGANISMOS LEVEDURIFORMES CONTRA LEVEDURAS PATOGÊNICAS AO HOMEM
Iris Darly Dias Carneiro 1
Marcielle dos Santos Silva 1
Bruno Motta Oliveira 1
Rodrigo Queiroz de Oliveira 1
Ana Paula Trovatti Uetanabaro 1, 2
1. Universidade Estadual de Feira de Santana/UEFS
2. Universidade Estadual de Santa Cruz/UESC
INTRODUÇÃO:

A produção de proteínas com propriedades antimicóticas, chamadas de toxinas killer, é um fenômeno comum em vários gêneros de leveduras. Dentre as funções de tais toxinas está a aplicação biomédica como novos agentes antimicóticos. Os tratamentos de micoses e dermatofitoses crônicas e severas ocorrem geralmente através do uso de agentes antifúngicos orais ou tópicos. Porém o fato das infecções fúngicas serem normalmente recalcitrantes à terapia, aliado à constatação das drogas utilizadas causarem diversos efeitos colaterais,faz com que haja uma necessidade contínua por novas classes de compostos antimicóticos de maior eficácia e segurança. O presente trabalho teve por objetivo detectar a atividade killer de leveduras sobre cepas padrões de sensibilidade (Candida glabrata Y55 e Saccharomyces cerevisiae NCYC 1006) e sobre nove leveduras patogênicas ao homem.

METODOLOGIA:

Os testes killer foram realizados com 41 linhagens isoladas de diferentes regiões da Bahia. As leveduras com atividade killer foram testadas contra 9 leveduras patogênicas ao homem Candida tropicalis CCMB 348 (Ct); Candida krusei CCMB 287 (Ck); Candida parapsilosis CCMB 241(Cp241); Candida albicans CCMB 286(Ca286); Rhodotorula glutinis CCMB 242 (Rg); Candida albicans CCMB 266 (Ca266); Mallasezia furfur CCMB 293 (Mf), Candida famata 347 (Cf) e Candida parapsilosis CCMB 288 (Cp288). Suspensões das leveduras sensíveis (Y55 e NCYC 1006) foram ajustadas para aproximadamente 5 x 104 UFC/mL e 100µL foram espalhados sobre o ágar YEPD-MB (pH 4,5), sendo as culturas das leveduras a serem testadas inoculadas sobre este tapete de células. As placas foram incubadas a 28°C por 72 h. As leveduras testadas foram consideradas killer positivas caso produzissem uma zona de inibição ao redor do inóculo e uma zona azul adjacente indicando morte celular da linhagem sensível. Como referência da atividade killer, foi utilizada a linhagem Saccharomyces cerevisiae (Sc), produtora da toxina K1 contra as duas linhagens padrões de sensibilidade killer. Os testes foram realizados em triplicata e em duas temperaturas: 25° e 28°C.

RESULTADOS:

Dentre os 33 microrganismos analisados, encontraram-se 2 com atividade killer contra pelo menos uma das linhagens padrões de sensibilidade killer utilizadas. O Trichosporonoides sp. CCMB 303 apresentou atividade sobre ambas as linhagens padrões de sensibilidade. Aureobasidium pullulans CCMB 307 apresentou resultado positivo para atividade killer somente contra a NCYC 1006. Os testes na segunda etapa obtiveram os seguintes resultados a 28°C: Candida sp. 7 apresentou atividade positiva contra Ct; Ck; Cp241 e Ca286. Starmerella sp. inibiu Ct; Ck; Cp241; Ca286 e Rg. Saccharomyces cerevisiae e Candida krusei só apresentaram halo de inibição contra a Ck. Kloeckera apis, Metschnikowia reukaufi, Pichia kluyveri, Aureobasidium pullulans e Trichosporonoides sp. não apresentaram nenhum resultado positivo a 28°C. A 25°C, Candida sp. 7 apresentou halo de inibição contra Rg; Cp241; Ca266 e Ck. Starmerella sp. inibiu as linhagens de Cp241; Ca266 e Ck. Pichia kluyveri e Candida krusei inibiram somente uma outra linhagem de Ck. Kloeckera apis apresentou resultado positivo contra Rg; Cp241; Ca266 e Ck. Trichosporonoides sp. apresentou teste killer positivo contra Rg; Cp241; Ca266 e Ck.O Aureobasidium pullulans, Sc e a Metschnikowia reukaufi não obtiveram nenhum resultado a 25°C.

CONCLUSÃO:

A partir das análises observou-se que aproximadamente 78% das leveduras consideradas killer conseguiram inibir o crescimento de pelo menos uma levedura patogênica ao homem. Somente duas das linhagens consideradas killer (Metschnikowia reukaufi e Aureobasidium pullulans CCMB 307) não inibiram o crescimento de pelo menos uma levedura patogênica ao homem. Das nove leveduras patogênicas utilizadas, somente três delas não demonstraram sensibilidade por nenhuma das killers testadas. (Mallasezia furfur CCMB 293, Candida famata 347 e Candida parapsilosis CCMB 288). Conclui-se que os resultados obtidos no presente trabalho da incubação a 25°C foram os mais expressivos em termos de número de leveduras killer com atividade sobre os microrganismos patogênicos testados. Por outro lado, os resultados a 28°C foram melhores em se tratando da expressividade no tamanho dos halos. Este trabalho serviu para reafirmar como as leveduras e toxinas killer apresentam um grande potencial biotecnológico, destacando o seu provável potencial terapêutico como antimicóticos naturais e suprindo a necessidade do controle de enfermidades. Além de também colaborar para a diminuição do problema da resistência terapêutica causada pelos antimicóticos convencionais.

Instituição de Fomento: Universidade Estadual de Feira de Santana
Palavras-chave: Levedura patogênica ao homem , Atividade killer, Semi-Árido.