61ª Reunião Anual da SBPC

E. Ciências Agrárias - 1. Agronomia - 3. Fitossanidade

SELEÇÃO DE OLIGONUCLEOTÍDEOS INICIADORES ESPECÍFICOS PARA Erwinia psidii COM BASE EM SEUS PERFIS DE REP - PCR

Naiara Pontes Diniz de Oliveira 1 Abi Marques 2 Marisa Ferreira 1

1. Universidade de Brasília 2. Embrapa Cenargen

INTRODUÇÃO:

A goiabeira é uma cultura econômica e socialmente importante no Brasil, que é o maior produtor de goiabas vermelhas no mundo. Um dos principais problemas fitossanitários da cultura é a seca-dos-ponteiros ou bacteriose, causada pela bactéria Erwinia psidii. No Distrito Federal já foram relatadas perdas de até 85% nos pomares da região. O presente trabalho teve por objetivo desenvolver um método molecular para detecção e identificação de E. psidii através do desenvolvimento de oligonucleotídeos iniciadores específicos para este patógeno, visando sua utilização em PCR (reação da polimerase em cadeia). Este método poderá ser empregado como ferramenta na diagnose da seca-dos-ponteiros.

METODOLOGIA:

Foi adotada uma estratégia baseada nos perfis genômicos gerados por rep-PCR (PCR baseado nas seqüências repetitivas ERIC, REP ou BOX). Bandas de tamanhos entre 300 e 500 pb foram selecionadas, excisadas dos géis e eluídas em água. Em seguida foram submetidas à nova amplificação ou purificadas através do kit Wizard® SV Gel and PCR Clean-Up System (Promega) e enviadas para seqüenciamento. A seqüência parcial de 373 pb de um fragmento de 500 pb gerado por ERIC-PCR foi obtida e analisada com os programas BioEdit e BLASTN. Em seguida, utilizou-se o programa Primer3 para desenho de dois pares de iniciadores (E65L/E301R e R24L/R268L). Após otimização das condições para amplificação selecionou-se o par E65L/E301R para os testes de especificidade com 14 isolados de E. psidii e 8 isolados bacterianos da flora da goiabeira.

RESULTADOS:

Foi observada amplificação de um fragmento de aproximadamente 250 pb com DNA de 11 isolados de E. psidii, não havendo amplificação do fragmento de tamanho esperado de nenhum dos isolados da flora da goiabeira.

CONCLUSÃO:

Os resultados mostraram que o par de iniciadores sintetizados são candidatos potenciais para uso em um método molecular de diagnose da seca dos ponteiros.

Instituição de Fomento: CNPq

Palavras-chave: Erwinia psidii, Seca dos ponteiros, Rep-PCR.