Os representantes do gênero Listeria pertencem à família Corynebacteriaceae, que conta com as seguintes espécies: Listeria monocytogenes, Listeria ivanovii, Listeria innocua, Listeria seeligeri, Listeria welshimeri e Listeria grayi. Todas as espécies de Listeria podem, eventualmente, ser contaminantes de alimentos. Entretanto, a única espécie patogênica para o homem é a L. monocytogenes. Os microrganismos desse gênero estão amplamente distribuídos no ambiente e que têm seu habitat natural o solo e vegetais, incluindo os cultivados. Os animais podem ser portadores da bactéria e suas fezes transformarem-se em fonte de contaminação. Devido à importância da higiene dos alimentos para a saúde pública e principalmente pela transmissibilidade desta bactéria ao homem pelos alimentos de origem animal, este trabalho propôs -se a promover o desenvolvimento de um rápido diagnóstico diferencial das diferentes espécies de Listeria por análise polimórfica de restrição de fragmentos amplificados pela reação em cadeia da polimerase (PCR) do gene 23S Rrna, a partir de cepas de Listeria previamente isoladas identificadas por análises microbiológicas tradicionais em carnes e produtos derivados produzidos e/ ou comercializados no Distrito Federal.

A metodologia de identificação microbiológica de isolamento da Listeria utilizada foi a descrita pela Instrução Normativa n° 40, de 12 de dezembro de 2005 do Ministério da Agricultura, de Pesquisa de Listeria em produtos cárneos e derivados. Para a realização da RFLP-PCR foi realizado o crescimento das cepas, previamente isoladas de produtos cárneos, em meio L (1% de peptona, 0,5%  de extrato de levedura e 1% de NaCl)  à 250rpm sob temperatura de 37ºC over night, em seguida realizou-se a extração de DNA total pelo método de fenol/ clorofórmio (SAMBROOK and RUSSELL,  2001). Para a realização da PCR, foram utilizados os primers S1 (S1F: 5′-AGTCGGATAGTATCCTTAC-3′ e S1R: 5′-GGCTCTAACTACTTGTAGGC-3′) e S2 (S2F 5′-GCCTACAAGTAGTTAGAGCC-3′ e S2 R: 5′-ACTGGTACAGGAATCTCTAC-3’). Após a determinação da região a ser amplificada, as seqüências preditas dos amplicons foram alinhadas para a verificação dos sítios de restrições presentes para permitir a diferenciação. Os sítios presentes são XmnI, CfoI, AluI e ClaI.  Todos os produtos da PCR e os produtos oriundos das digestões dos amplicons foram visualizados, em gel de agarose a 2% corado com brometo de etídio 0,5µg/ml, em transiluminador de raio ultravioleta.

Das 47 cepas de Listeria isoladas de carnes comercializadas no DF, 36 cepas foram identificadas como Listeria innocua, 11 cepas como Listeria monocytogenes pelo kit API Listeria®. Todas foram submetidas à RFLP-PCR, sendo que das 47 cepas, 36 foram confirmadas por RFLP-PCR como Listeria innocua, sendo que 01 amostra de Listeria welshimeri estava associada com Listeria innocua. Todas as 11 cepas identificadas previamente como Listeria monocytogenes no teste microbiológico tradicional foram confirmadas pela RFLP-PCR.

A identificação de espécies de Listeria em produtos cárneos por análise polimórfica de restrição de fragmentos de PCR do gene 23S rRNA mostrou-se um método com maior precisão do diagnóstico que o método bioquímico, além de ter se mostrado mais rápido e menos oneroso. O método mostrou-se efetivo na diferenciação das espécies de Listeria.