61ª Reunião Anual da SBPC

C. Ciências Biológicas - 13. Parasitologia - 6. Parasitologia

CARACTERIZAÇÃO BIOLÓGICA DE UM “STOCK” DE Trypanosoma cruzi ISOLADO NO CENTRO DE CIÊNCIAS MÉDICAS E BIOLÓGICAS - PUCSP.

Claudio Roberto Anholetto Junior 1 Vanda Aparecida Gavino de Castro 2

1. Departamento de Morfologia e Patologia/PUC-SP. 2. Professora Me. Orientadora/PUC-SP.

INTRODUÇÃO:

Tripanossomíase descoberta em 1909 por Carlos Chagas, no triatomíneo Panstrongylus megistus, a doença de Chagas foi detectada primeiramente no estado de Minas Gerais e disseminou-se progressivamente por toda a América Latina. Esta antropozoonose causada pelo protozoário hemoflagelado Trypanosoma cruzi, acontece somente no continente americano e acomete aproximadamente 17 paises, ocorrendo do sul dos Estados Unidos até a Argentina e Chile. Variações intra-especificas nas diferentes cepas (isolado do parasito obtido a partir de insetos vetores, mamíferos e seres humanos infectados de forma natural) de T.cruzi, têm sido demonstradas através de pesquisas do comportamento biológico do parasito. Sendo assim, torna-se apropriada a caracterização de novos “stocks”, já que os vários aspectos biológicos e morfológicos das cepas T.cruzi podem estar na dependência de diversos fatores, inclusive hospedeiros funcionando como meio seletivo para estes organismos, que podem ser considerados clones selecionados, em função das variantes encontradas numa relação parasita-hospedeiro-ambiente. O presente trabalho tomou por objetivo a caracterização biológica do stock denominado “Benedita” isolado no ano de 2005, através de xenodiagnóstico no CCMB-PUCSP.

METODOLOGIA:

O “stock” de T. cruzi denominado “Benedita”, isolado em 2005 no xenodiagnóstico de uma paciente procedente do Estado do Paraná, foi mantido através de repiques sucessivos em meio BHI, no laboratório de Imunologia do CCMB-PUCSP. Como controle, a cepa Y, mantida rotineiramente no laboratório, foi utilizada. O cultivo em meio BHI foi empregado para manutenção e análise das formas epimastigotas, além da mensuração de metaciclogênese, definida a partir da relação entre o número de formas Epimastigotas e Tripomastigotas Metacíclicas encontradas no decorrer de 30 dias a partir do repique inicial. Camundongos BALB/c foram infectados intraperitonealmente com 105 formas sangüíneas da cepa em estudo, para análise morfológica das formas tripomastigotas, e realização da curva parasitêmica. A partir do sangue retirado de cada animal do 5º ao 11º dia de infecção, foram avaliados: morfologia do parasito no sangue periférico, curva parasitêmica, mortalidade, metaciclogênese e período pré-patente. Para confecção da curva parasitêmica, foram examinados diariamente ao microscópio, 5μl de sangue da cauda dos animais, para a contagem das formas segundo a técnica de Brener.

RESULTADOS:

Ambas as cepas exibiram um período pré-patente médio de 5 dias e baixos índices de metaciclogênese até aproximadamente o 20º dia de cultivo. Picos de metaciclogênese não foram observados durante o experimento, porém do 25º ao 30º dia de cultura um grande aumento no número de formas metacíclicas foi verificado. Em relação às formas tripomastigotas, a análise morfológica dos parasitos constatou a presença de formas delgadas, delgadas médias e largas, e em ambas as cepas ocorreu predomínio das formas delgadas médias durante todo o curso da infecção. Divergindo da literatura, picos de formas largas foram observados no início da infecção e de formas delgadas posteriormente. A Cepa Y apresentou células maiores quanto ao comprimento total do parasito e todas as outras medidas, exceto em relação à distância da extremidade anterior ao meio do núcleo. Os parasitos apresentaram comprimento total médio do corpo de 19.57 μm em Benedita e 20.45 μm em Y, medidas estas compatíveis com aquelas apresentadas em outros estudos. Quanto à parasitemia, os animais inoculados com a cepa Benedita apresentaram menor número de parasitos circulantes praticamente durante todos os dias de infecção e também no pico parasitêmico, que ocorreu no 7º dia após a infecção, para ambas as cepas.

CONCLUSÃO:

Disparidades quanto as taxas de metaciclogênese e parasitemia foram observadas entre as duas cepas. Ainda assim, o “stock” Benedita enquadra-se no grupo II, o mesmo que Y, já que apresenta período pré-patente, taxas de mortalidade e morfologia similares a esta cepa. O “stock” isolado enquadra-se como uma cepa doméstica, resultado condizente com o tipo de ambiente rural em que a paciente de onde Benedita foi isolada vivia, quando provavelmente foi infectada. As duas cepas causaram a morte dos animais infectados ainda na fase aguda da infecção, por volta de doze dias após a inoculação dos parasitos, porém, divergindo da literatura, não foi a cepa com maior porcentagem de formas delgadas que apresentou maior parasitemia. A partir das taxas de mortalidade dos animais e parasitemia, as duas cepas podem ser classificadas como sendo de alta virulência.

Instituição de Fomento: PIBIC-CEPE.

Palavras-chave: Trypanosoma cruzi, “stock”, caracterização biológica.