A dengue é causada por um vírus RNA de fita simples polaridade positiva, envelopado, do gênero Flavivirus, família Flaviviridae, contendo quatro sorotipos antigenicamente relacionados (DENV 1-4). O modo de transmissão se dá através dos vetores artrópodes Aedes aegypti e Aedes albopictus, que estão presentes nas áreas tropicais e subtropicais mais povoadas do mundo. Até o ano 2009, mais de 240 mil casos de dengue foram notificados no Estado do Rio Grande do Norte (RN), com epidemias ocorrendo quase que anualmente, causando um grande impacto de saúde pública. Diante deste cenário, poucos estudos têm sido realizados para caracterizar estas epidemias, principalmente aqueles que envolvem métodos moleculares de tipagem viral. Neste contexto, o trabalho teve como objetivo implantar e avaliar novas metodologias para a pesquisa e o diagnóstico molecular dos vírus dengue (DENV) no RN.

Isolados de DENV-1, DENV-2 e DENV-3, gentilmente fornecidos pelo Laboratório de Flavivírus do Instituto Oswaldo Cruz - Fiocruz foram utilizados como controles para o estabelecimento e avaliação dos métodos. O RNA viral das amostras foi extraído através do QIAamp Viral Mini Kit (QIAGEN, Inc., Valencia, EUA), de acordo com o protocolo descrito pelo fabricante. Foi utilizada a metodologia descrita por Lanciotti et al. (1992) (J Clin Microbiol. 1992; 30(3):545-51) para detecção e tipagem dos DENV. Este protocolo detecta os quatro sorotipos simultaneamente em um procedimento semi-nested, gerando produtos amplificados (amplicons) com tamanhos específicos (em pares de base) para cada sorotipo dos DENV. Para a análise dos amplicons, foi realizada a técnica de eletroforese em gel de poliacrilamida.

A concentração e o volume dos reagentes foram otimizados com vistas a aumentar a sensibilidade e a eficiência do protocolo. Todos os controles amplificaram com eficiência, ficando comprovado ao fazer a análise das bandas específicas para cada controle na eletroforese em gel de poliacrilamida.

De uma forma geral, o método foi implantado com sucesso e o desenvolvimento deste projeto colocou o Estado do Rio Grande do Norte em um patamar mais elevado em relação ao diagnóstico molecular dos vírus dengue. Como perspectiva, espera-se aplicar estes métodos em amostras clínicas provenientes de pacientes com suspeita de dengue, dando suporte a pesquisa básica e aplicada em dengue e contribuindo para a compreensão da atividade destes vírus na região.