62ª Reunião Anual da SBPC

C. Ciências Biológicas - 3. Bioquímica - 6. Bioquímica

Isolamento e Caracterização de receptores solúveis de lectinas de sementes DA SUBTRIBO Diocleinae.

Cláudia Martins de Oliveira ¹
Renato de Azevedo Moreira ²

1. Faculdade Natalense para o Desenvolvimento do Rio Grande do Norte - FARN
2. Universidade de Fortaleza - UNIFOR

INTRODUÇÃO:

As lectinas constituem uma classe especial de proteínas com a propriedade peculiar de interagir específica e reversivelmente com carboidratos e glicoconjugados. Esta habilidade das lectinas sugere um papel biológico relevante in vivo, porém tal hipótese exige a presença de receptores endógenos. Lectinas da subtribo Diocleinae mostram um elevado grau de similaridade estrutural, possuindo afinidade pelos monossacarídeos D-glucose e D-manose, interagindo com uma variedade de carboidratos simples e estruturas glicanas complexas. O objetivo do trabalho foi isolar e caracterizar essas moléculas receptoras, e, sua identificação estrutural poderá elucidar as funções biológicas endógenas propostas para as lectinas vegetais.

METODOLOGIA:

Sementes destegumentadas foram trituradas e os receptores lectínicos solúveis foram extraídos das farinhas em solução de NaCl 0,15M e isolados por cromatografia em colunas de Sepharose-4B ativadas com as lectinas imobilizadas de Dioclea altíssima, Canavalia brasiliensis e Cratylia floribunda. Os picos retidos das cromatografias dos extratos salinos em colunas de Sepharose 4B-lectinas foram submetidos à determinação quantitativa de carboidratos pelo método fenol-sulfúrico (DUBOIS et al., 1956), utilizando galactose como padrão. Os ensaios de poder inibitório dos receptores solúveis sobre a atividade hemaglutinante das lectinas foram realizados em placas de microtitulação, em triplicata. Os pares lectinas-receptores isolados foram analisados conforme ensaios eletroforéticos (Laemmli, 1970).

RESULTADOS:

Receptores solúveis capazes de interagir com as lectinas de Dioclea. altíssima, Canavalia brasiliensis e Cratylia floribunda foram isolados por cromatografias de afinidade em colunas de Sepharose-lectinas. As concentrações de carboidratos dos picos retidos das cromatografias dos extratos salinos em colunas de Sepharose-lectinas foram estimadas com relação a uma curva padrão de galactose variando de 10 a 100 mg.mL^-1 de concentração. De acordo com a curva padrão, foram encontradas concentrações percentuais de 2,76%, 2,20% e 1,40% de frações glicídicas nas soluções protéicas dos picos retidos de Dioclea altíssima, Canavalia brasiliensis e Cratylia floribunda, respectivamente, em colunas de Sepharose 4B-lectinas. Por eletroforese SDS-PAGE com e sem β-mercaptoetanol, os receptores solúveis apresentaram-se como duas bandas protéicas de massas moleculares aparentes de aproximadamente 66 kDa e 70 kDa.

CONCLUSÃO:

As lectinas glucose/manose-ligantes das sementes de Canavalia brasiliensis, Dioclea altíssima e Cratylia floribunda interagem com receptores solúveis endógenos presentes nas farinhas dessas sementes. Os receptores solúveis isolados não foram capazes de inibir a ação hemaglutinante das lectinas, possivelmente devido ao fato da interação lectina-hemácias ser mais favorável que a interação lectina-receptor.

Instituição de Fomento: CAPES, CNPq.

Palavras-chave: Lectinas, Receptores, Diocleinae.