A urtiga (Urtica dioica L.) pertence à família urticaceae e apresenta numerosas aplicações, tanto medicinais como industriais. Dentre estas, destaca-se o emprego de substâncias extraídas de plantas medicinais e/ou silvestres, como fungicidas, com inúmeras vantagens quando comparado ao emprego de sintéticos, pois os fungicidas naturais são obtidos de recursos renováveis e são rapidamente degradáveis. As plantas possuem biomoléculas constitutivas e/ou induzidas, como os inibidores de proteinases, que participam de um complexo mecanismo de defesa, podendo ocorrer em folhas, sementes, tubérculos e flores. Os inibidores de proteinases são um dos componentes protéicos com ação protetora para muitas espécies, possibilitando sua atuação na defesa das plantas principalmente por retardar a proteólise de paredes celulares e de proteínas de membrana, promovendo a desorganização celular e dificultando a atuação de patógenos. O objetivo geral deste trabalho foi monitorar o efeito in vitro de extrato total de U. dioica sobre o fungo S. rolfsii, dosar proteínas totais e detectar a presença de inibidores de serinoproteinases em extrato foliar de urtiga.

Os experimentos foram realizados no Laboratório de Microbiologia do Instituto de Ciências Agrárias (UFAM), Laboratório de Bioquímica do Instituto de Ciências Biológicas (UFAM) e Laboratório de Bioquímica e Fisiologia Vegetal (INPA). As folhas de U. dioica foram coletadas na Floresta do Campus da Universidade Federal do Amazonas. O fungo foi cultivado em placas contendo meio BDA (batata-dextrose-ágar) com extrato vegetal de U. dioica em temperatura ambiente. O delineamento experimental foi inteiramente ao acaso com 10 repetições, sendo cada unidade amostral uma placa de Petri. A testemunha foi constituída pelo cultivo do fungo em placas contendo somente o meio de BDA. A quantificação das proteínas totais no extrato foi feita de acordo com o método descrito por Bradford (1976), utilizando a BSA (albumina sérica bovina) como padrão. A hidrólise dos substratos e a determinação da atividade residual da tripsina e quimotripsina, foram monitoradas fotometricamente a 405nm. A eletroforese foi realizada em SDS-PAGE 12,5%. Como marcadores de massas moleculares foram utilizados marcadores BenckMark Protein Ladder (220 kDa - 10 kDa).

De acordo com os dados obtidos, o extrato aquoso de U. dioica apresentou efeito significativo na inibição do crescimento micelial do fungo S. rolfsii in vitro na concentração de 10%. Foi possível observar que, após 6 dias, o  controle alcançou um nível de crescimento micelial de 9,0 cm de diâmetro, atingindo as bordas da placa de Petri. Por outro lado, o tratamento com extrato de urtiga resultou em crescimento de apenas 1,7 cm de diâmetro. O teor de proteínas foi de aproximadamente 0,040 mg/mL. Quanto à análise eletroforética em SDS-PAGE, não foi possível visualizar os perfis das bandas de proteínas no extrato de urtiga pelos métodos de coloração por Coomassie Brilliant Blue e nitrato de prata, provavelmente porque a extração das proteínas de folhas depende, em grande parte, do grau de desintegração celular, que afeta a quantidade de proteína que se obtém durante o processo. O extrato foliar de urtiga inibiu a ação das serinoproteinases tripsina e quimotripsina, sendo os valores para a atividade residual das enzimas de 56,4% e 64,8%, respectivamente, sugerindo a ocorrência de inibidores de serinoproteinases no extrato foliar dessa espécie.

O extrato total obtido a partir de folhas de urtiga inibiu 98,1% do crescimento micelial do fungo S. rolfsii, sugerindo a presença de moléculas com possibilidade de serem empregadas no combate de fungos fitopatogênicos. Os ensaios enzimáticos revelaram a presença de inibidores de serinoproteinases nos extratos foliares de urtiga. Quanto à extração de proteínas, métodos alternativos deverão ser testados com extratos foliares dessa espécie.