62ª Reunião Anual da SBPC

C. Ciências Biológicas - 3. Bioquímica - 3. Enzimologia

PROSPECÇÃO DE ATIVIDADES LIPASE/ESTERASE EM FUNGOS ENDOFÍTICOS DE FOLHAS E SEMENTES DE Ingá edulis e Ingá laurina

Késia Marisla Rodrigues da Paz ¹
Denize Jussara Rupolo ¹
Jaílton Marques da Silva ²
Vívia Lúcia Juvino de Lemos ²
Helder Lopes Teles ²
Helen Cristina Fávero Lisboa ¹

1. Curso de Enfermagem, Universidade Federal de Mato Grosso - UFMT
2. Depto de Ciências Biológicas, Universidade Federal de Mato Grosso - UFMT

INTRODUÇÃO:

Com o desenvolvimento de novas tecnologias mais complexas e sofisticadas, busca-se permitir ao homem uma melhor qualidade de vida, com menores danos aos seres vivos e ao meio ambiente. Ao longo da história, microrganismos têm sido fontes naturais de compostos com atividade biológica, atendendo às necessidades requeridas pelas novas tecnologias. Metabólitos naturais provenientes de tais organismos atuam como valiosos agentes na medicina e agricultura, proporcionando uma série de benefícios à humanidade. Dentre estes microrganismos inserem-se os fungos endofíticos, que vêm se destacando pelo grande potencial na produção de metabólitos bioativos e enzimas de grande interesse na indústria farmacêutica. A descoberta de novas fontes de enzimas, através de bioprospecção extensiva e persistente, vem sendo constantemente requerida. Desta forma, o principal objetivo deste trabalho foi a prospecção da atividade lipase/esterase em fungos endofíticos associados às espécies Ingá edulis Mart. e Ingá laurina (SW) Willd., plantas nativas do cerrado de Mato Grosso.

METODOLOGIA:

Realizou-se a coleta de folhas e sementes saudáveis das espécies vegetais I. edulis e I. laurina e procedeu-se o isolamento dos fungos endofíticos. Para os ensaios de triagem de atividade biocatalítica, os fungos isolados foram cultivados em meio BDA (Batata Dextrose Agar) por 72 horas à 30 ^oC. Após o tempo de incubação foi preparada uma suspensão fúngica na concentração de 1 mg/mL, e usada para a triagem de lipase/esterase através do teste da adrenalina. Neste ensaio, a enzima hidrolisa o substrato (glicose acetilada e galactose acetilada) periodato-resistente, gerando um produto periodato-sensível que é rapidamente oxidado pelo periodato de sódio. A adrenalina, um reagente cromogênico, é adicionada à reação para quantificar o periodato que não reagiu, sendo sua hidrólise proporcional à redução da coloração vermelha do adrenocromo formado. Para este ensaio,1200 μL da suspensão fúngica, foi adicionada a 1200 μL de solução tampão Borato (50 mM; pH 8,0), 300 μL de substrato (10 mM) e 300 μL de periodato de sódio (10 mM). Após 20 horas de incubação, foi adicionado 450 μL de adrenalina (10 mM) e a leitura realizada em espectrofotômetro (490 nm).

RESULTADOS:

A triagem de lipase/esterase foi realizada em 16 fungos endofíticos, permitindo que esses fossem agrupados de acordo com os níveis de atividade biocatalítica. Considerando-se que neste ensaio a atividade enzimática é proporcional à redução da coloração e que as leituras dos controles positivos (coloração mínima) e negativo (coloração máxima) foram de 0,443 e 1,362, respectivamente, estabeleceu-se uma classificação dos níveis da atividade enzimática: atividade não detectada (acima de 1,300); baixa atividade (1,000 - 1,300); atividade intermadiária (0,700 - 0,999) e alta atividade (0,443 - 0,699). A partir do critério estabelecido, 81% dos fungos apresentaram atividade biocatalítica frente aos substratos glicose acetilada, sendo 69% com baixa atividade e 12% com média atividade. Em relação à galactose acetilada, a atividade lipase/esterase indica estar ausente em todos os fungos. Este resultado pode ser explicado quando se considera a seletividade intrínseca de cada enzima e as características estereosseletivas do substrato, já que com tal resultado pode-se evidenciar que a glicose acetilada apresentou uma melhor resposta em comparação com a galactose acetilada

CONCLUSÃO:

A triagem de lipase/esterase pelo método da adrenalina permitiu um perfil geral da produção destas enzimas pelos fungos endofíticos, bem como a especificidade enzima-substrato. Os resultados mostram que a maioria dos fungos estudados apresenta atividade lipase/esterase, ainda que em diferentes níveis, evidenciando os endófitos como potenciais produtores de enzimas de interesse comercial. Segue-se o trabalho com outros fungos, diferentes metodologias, prospecção de outras enzimas e ensaios de biotransformação (biocatálise) utilizando as linhagens que apresentaram melhores desempenhos na triagem.

Instituição de Fomento: Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico - (CNPq) e Fundação de Amparo a Pesquisa no Estado de Mato Grosso (FAPEMAT).

Palavras-chave: Fungos endofíticos, Lipase, Esterase.