62ª Reunião Anual da SBPC

C. Ciências Biológicas - 3. Bioquímica - 3. Enzimologia

PERFIL DE PRODUÇÃO ENZIMÁTICA POR FUNGOS ENDOFÍTICOS DE ESPÉCIES VEGETAIS DO CERRADO

Denize Jussara Rupolo 1 Késia Marisla Rodrigues da Paz 1 Helen Cristina Fávero Lisboa 1 Helder Lopes Teles 2 Jailton Marques da Silva 2 Vívia Lúcia Juvino de Lemos 2

1. Curso de Enfermagem/ Universidade Federal do Mato Grosso/ CUR 2. Departamento de Ciencias Biologicas/ Universidade Federal do Mato Grosso/ CUR

INTRODUÇÃO:

Ao longo da história, microrganismos têm sido considerados importantes fontes naturais de compostos com atividade biológica. Metabólitos naturais provenientes de tais organismos atuam como valiosos agentes em benefício da humanidade. Dentre eles, os fungos destacam-se por produzir uma extensa variedade de metabólitos secundários e de enzimas, com amplo campo de aplicações. Atualmente, o nicho dos fungos endofíticos vem revelando sua notável produção metabólica e enzimática, sua facilidade de adaptação e crescimento e sua utilização na produção de produtos de interesse biotecnológico, evidenciando-os como grandes expoentes de pesquisa. A descoberta de novas enzimas microbianas, através de bioprospecção extensiva e persistente, tem gerado muitas rotas novas e simples para processos de síntese e resolução de problemas ambientais, impulsionando a descoberta de novas fontes de enzimas em um grande número de microrganismos. Dessa forma, o principal objetivo desse trabalho foi a triagem de enzimas de interesse biotecnológico (lipase/esterase, epóxido-hidrolase e protease) em um grupo de fungos endofíticos isolados de Ingá edulis Mart. e Ingá laurina (SW) Willd., nativas do cerrado de Mato Grosso.

METODOLOGIA:

Inicialmente foi realizado o isolamento e a purificação dos fungos endofíticos associados às folhas e sementes saudáveis de I. edulis e I. laurina. Depois de isolados, os fungos foram cultivados por 72 horas a 30 oC em meio BDA (batata dextrose agar), sendo retirada uma pequena amostra do micélio e preparada uma suspensão fúngica na concentração de 1 mg/mL em tampão borato 50mM (pH 8,0). Esta foi submetida à triagem de lipase/esterase e epóxido-hirolase pelo método da adrenalina, através da mistura de 1200 μL da suspensão fúngica, 1200 μL de solução tampão borato, 300 μL de substrato 10 mM (óxido de estireno para epóxido-hidrolase e glicose-acetilada para lipase/esterase) e 300 μL de periodato de sódio 10 mM. Após 20 horas de incubação, adiciona-se 450 μL de adrenalina (10 mM) e procede-se a leitura em espectrofotômetro a 490 nm. A triagem foi também realizada para a atividade protease, através do crescimento dos fungos em placa contendo agar nutriente e 8% de substrato (gelatina). Após 96 horas de crescimento é observada a formação de um halo claro ao redor das colônias, caracterizando a presença da atividade proteolítica sobre o substrato.

RESULTADOS:

Foram isolados 16 fungos endofíticos, sendo 13 de folhas (IEF e IE) e 2 de sementes (IES) de I. edulis, e 1 de folhas de I. laurina (ILF). Todos foram previamente codificados e somente serão submetidos à identificação de gênero e espécie quando apresentarem resultados significativos e promissores. Foi observado que 81% dos fungos apresentaram atividade lipase/esterase (IEF-01; IEF-01A; IEF-01B; IEF-5A; IEF-09; IEF-14; IEF-17A; IE-3A; IE-3B; IE-4B; IES-1B; IES-03; ILF-04), 75% mostram atividade epóxido-hidrolase (IEF-01; IEF-5A; IEF-09; IEF-14; IEF-17A; IE-3B; IE-4B; IES-1B; IES-03) e nenhum fungo apresentou atividade proteolítica. Observa-se que a maioria dos fungos estudados apresenta atividade lipase/esterase e epóxido-hidrolase num padrão de reatividade diferenciado. Esse padrão apresentou-se reprodutível, sendo desta forma considerado como um padrão intrínseco para cada fungo em relação a uma determinada atividade enzimática.

CONCLUSÃO:

Por meio desses ensaios foi possível a triagem de algumas das atividades biocatalíticas apresentadas pelos fungos endofíticos. Foram encontrados fungos com satisfatória atividade enzimática frente às metodologias e substratos utilizados, mostrando a grande versatilidade dos endófitos na produção de enzimas, especialmente as de interesse comercial como as lipases/esterases e epóxido-hidrolases.

Instituição de Fomento: Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico - (CNPq) e Fundação de Amparo a Pesquisa no Estado de Mato Grosso (FAPEMAT)

Palavras-chave: Fungos endofíticos, Enzimas, Hidrolases .