62ª Reunião Anual da SBPC

C. Ciências Biológicas - 10. Microbiologia - 3. Microbiologia

PESQUISA DE NOVOS FLAVIVIRUS NO ESTADO DO RIO GRANDE DO NORTE.

Daíse Maria Cunha de Sousa 1 Mário Sérgio Duarte Branco 1 Derley Galvão de Oliveira 1 José Veríssimo Fernandes 1 Maria de Fátima Freire de Melo Ximenes 1 Josélio Maria Galvão de Araújo 1

1. Depto. de Microbiologia e Parasitologia - UFRN

INTRODUÇÃO:

O gênero Flavivirus pertence à família Flaviviridae, composto por um vasto grupo de vírus patogênicos transmitidos por artrópodes. São vírus RNA fita simples polaridade positiva que possuem cerca de 11.000 nucleotídeos (nt) e apenas uma fase aberta de leitura, codificando uma poliproteína que é posteriormente clivada em proteínas estruturais (C, prM, M e E) e não estruturais (NS1, NS2a, NS2b, NS3, NS4a, NS4b, NS5) (Arch Virol. 1995; 140(2): 391-392). As infecções causadas por estes vírus apresentam um amplo espectro clínico, variando desde infecções assintomáticas a formas graves como febre hemorrágica ou encefalites (J Virol Methods. 2005;126(1-2):101-9). Este trabalho teve como objetivo implantar e avaliar novos métodos moleculares para a pesquisa de novos Flavivírus no Estado do Rio Grande do Norte.

METODOLOGIA:

Isolados dos vírus dengue (DENV) sorotipo 1, DENV-2, DENV-3 e Febre Amarela vacinal (17DD) foram utilizados como controles para implantação da técnica de RT-nested-PCR genérico. O RNA viral foi extraído através do QIAmp Viral Mini Kit (QIAGEN, Inc., Valencia, EUA), de acordo com o protocolo descrito pelo fabricante. Foi utilizada a metodologia descrita por Sánchez-Seco et al., (2005) (J Virol Methods. 2005;126(1-2):101-9) para pesquisa e identificação de Novos Flavivírus. Uma região conservada do genoma dos Flavivirus (NS5) foi escolhida para permitir uma amplificação eficiente dentro deste grupo. Em uma primeira etapa, foram utilizados iniciadores genéricos consensuais (Flavi+1 e Flavi-1), complementares as seqüências dos genes que codificam a proteína NS5. Na segunda etapa, no procedimento nested, foram utilizados os iniciadores genéricos Flavi+2 e Flavi-2. O produto correspondente a segunda etapa do método foi submetido ao sequenciamento utilizando os iniciadores genéricos Flavi+2 e Flavi-2.

RESULTADOS:

A concentração e o volume dos reagentes foram otimizados com vistas a aumentar a sensibilidade e a eficiência do protocolo. Todos os controles amplificaram com eficiência e foram encaminhadas para o sequenciamento direto para identificação do agente viral por identidade genômica (através do BLAST - Basic Local Alignment Search Tool). Um banco de sequências nucleotídicas com representantes dos principais Flavivírus foi construído a partir do banco público de sequências nucleotídicas - Genbank (http://www.ncbi.nlm.nih.gov/Genbank/) com o objetivo de estabelecer relações filogenéticas entre os vírus identificados no Rio Grande do Norte e os vírus isolados em outras regiões ou países.

CONCLUSÃO:

Os vírus pertencentes ao gênero Flavivirus, como os vírus dengue (DENV), vírus da encefalite transmitida por carrapatos (tick-borne encephalitis virus - TBEV), vírus da encefalite Japonesa (JEV), vírus da encefalite do São Luiz (SLEV), vírus Rocio (ROCV), vírus da Febre Amarela (YFV) e o vírus do Nilo Ocidental (WNV), são responsáveis por grandes surtos e epidemias, representando um grave problema de saúde pública no Brasil e na América Latina. Algumas importantes Flaviviroses, como ROCV, SLEV e WNV, são caracterizadas por síndromes sistêmicas inespecíficas ou pela baixa incidência e, frequentemente, permanecem sem identificação mesmo em regiões com maior apoio laboratorial, o que causa uma subnotificação dos casos. No Estado do Rio Grande do Norte, são raros os estudos sobre quais Flavivirus circulam nesta região, provavelmente devido à falta de métodos disponíveis para a identificação destes agentes. Portanto, este estudo representa um importante passo para a pesquisa básica e aplicada em arbovirologia no RN.

Instituição de Fomento: Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico - CNPq; Fundação de Apoio à Pesquisa do Estado do Rio Grande do Norte - FAPERN e UFRN

Palavras-chave: Flavivírus, Epidemias, Rio Grande do Norte.