62ª Reunião Anual da SBPC
C. Ciências Biológicas - 3. Bioquímica - 1. Biologia Molecular
ALINHAMENTO MÚLTIPLO DE SEQUÊNCIAS DE PROTEÍNAS QUITINASES DE INTERESSE BIOTECNOLÓGICO EM CONTROLE BIOLÓGICO
Nureyev Ferreira Rodrigues 1
Helton Charllys Batista Cardôso 1
José Cezario de Almeida 2
1. Licenciado em Ciências, Habilitação em Biologia - UACEN, CFP, UFCG
2. Prof. Dr. - UACV, CFP, UFCG
INTRODUÇÃO:
As tecnologias da Biologia Molecular, incluindo, as ferramentas computacionais, têm contribuído para os estudos de seqüência, estrutura, função e homologia de proteínas de diversos organismos. As quitinases tem relevante interesse biotecnológico e sua utilização é fortemente empregada para o controle de insetos e fungos fitopatógenos. Beauveria bassiana vem sendo empregado, obtendo resultados promissores na inibição do desenvolvimento de insetos-praga pela ação das quitinases. Este trabalho foi desenvolvido, visando a detecção e comparação por metodologia computacional de quitinases com relevante similaridade às de B. bassiana, com a possibilidade de recomendação para o controle biológico.
METODOLOGIA:
A sequência de aminoácidos da endoquitinase de B. bassiana, proteína alvo, obtida do National Center for Biotechnology Information - NCBI (http://www.ncbi.nlm.nih.gov/) foi submetida à ferramenta BLAST do NCBI, na comparação dos diferentes graus de similaridade entre esta e as demais sequências do banco de dados. As sequências de quitinases que apresentaram quantidade de aminoácidos semelhante, grau relevante de similaridade, alto valor score e baixo valor e-value foram submetidas em alinhamento múltiplo no programa MultiAlin para a avaliação do alinhamento global. A presença de domínios conservados foi avaliada nas sequências por meio do Conserved Domains Database (http://www.ncbi.nlm.nih.gov/cdd). Uma árvore filogenética foi elaborada a partir das proteínas selecionadas pelo BLAST.
RESULTADOS:
Foram selecionadas sequências de quitinases de organismos, com diferentes quantidades de aminoácidos, graus de similaridade e valor e-value. As quitinases que apresentaram melhor score e com percentual de similaridade em 97,0% foram, respectivamente, com a proteína-alvo: Precursor quitinase de Aphanocladium álbum; endoquitinase de Lecanicillium lecanii; quitinase de Isaria farinosa; basic quitinase de Lecanicillium lecanii; quitinase de Lecanicillium psalliotae; quitinase de Verticillium fungicola; quitinase de Pochonia chlamydosporia; quitinase de Trichoderma viride; endoquitinase de Hypocrea lixii e, quitinase de Trichoderma longibrachiatum. Observou-se que outras proteínas demonstraram grau de similaridade de 99,0%, todavia, a quantidade de aminoácidos sobrepuja a proteína-alvo, sendo descartadas. Verificou-se que o domínio GH18_chitinase da proteína-alvo ocorreu em todas as quitinases. Baixos valores e-value, incluindo o 0,0 (zero), indicaram que os alinhamentos não foram ao acaso, assegurando a veracidade da informação. A presença de domínio conservado nos fungos analisados propõe a homologia entre as proteínas, inferindo a sua possível utilização no campo da pesquisa para controle biológico.
CONCLUSÃO:
As proteínas analisadas revelaram importante grau de similaridade com a endoquitinase de B. bassiana, sendo ainda necessária a aplicação de experimentos que mensurem seus efeitos quitinolíticos. As ferramentas computacionais empregadas demonstraram ser eficientes na busca e alinhamento das proteínas comparadas, sendo promissoras no emprego desse tipo de estudo.
Palavras-chave: Quitinase, Alinhamento Múltiplo, Homologia.