62ª Reunião Anual da SBPC
C. Ciências Biológicas - 3. Bioquímica - 2. Bioquímica dos Microorganismos
SECREÇÃO DE LIGNINA-PEROXIDASE (LiP) E MANGANÊS-PEROXIDASE (MnP) DO FUNGO Pycnoporus sanguineus  EM FERMENTAÇÃO  ESTACIONÁRIA.  
Elaine Pires Soares 1
Solange Pires de Araujo 2
Marcia Jaqueline Mendonca Maciel 1
Adriana da Silva Nunes 1
Helena Camarao 1
Ademir Castro e Silva 1
1. Universidade do Estado do Amazonas
2. Universidade Federal do Amazonas
INTRODUÇÃO:
Os fungos de podridão branca degradam a lignina mais rápida e extensivamente do que outros grupos de microrganismos e são os únicos grupos de organismos capazes de degradar completamente a lignina para dióxido de carbono e água (Eriksson et al., 1990). As enzimas responsáveis pela degradação da lignina são principalmente lignina-peroxidase (LiP), managês-peroxidase (MnP) e lacase. O potencial dessas enzimas ligninolíticas na indústria e biotecnologia tem estimulado pesquisas sobre sua atividade em fungos (Vikineswary et al., 2006; Songulashvili et al., 2007). A LiP e a MnP apresentam potencial uso na indústria alimentícia, indústria de celulose e papel, na indústria têxtil, na bioremediação e para síntese orgânica. (Lamascolo et al., 1999; Barbosa et  al. 2008; Sigoillot et al., 2005; Maijala et al., 2007;  Robles-Hernandez et. al, 2008; Champagne & Ramsay, 2005; Wen et al., 2009; Iwahara et al. 2000).  No setor médico e farmacéutico a LiP vem sendo pesquisada para uso  em cremes para redução de pigmentação da pele (Belinky et al., 2005). Considerando o potencial dessas peroxidases para aplicação industrial, o presente trabalho objetiva avaliar a atividade enzimática da LiP e MnP secretadas por Pycnoporus sanguineus em meio suplementados com diferentes fontes de carbono.
METODOLOGIA:
Cepa de Pycnoporus sanguineus foi coletada na zona rural do município de Manaus. Pequenos fragmentos do carpóforo foram inoculados em meio extrato de malte para posterior obtenção da cultura pura utilizada para determinação enzimática. O meio de crescimento foi composto de 3g de NaNO3 , 0,5 g KPO4 , 0,5 mg MgSO47H2O; 0,5g KCl e 0,01 FeSO4 7H2O, 24 mEq./l de NaNO3. O meio foi acrescido individualmente de α-celulose Sigma-Adrich (USA), xilana (Fluka Biochemika, Switzerland), dextrose anidra e serragem de madeira de Calophyllum brasiliensis e Aniba sp com e sem extrativos (extração com acetato de etila:etanol:água, 1:1:1). A atividade enzimática foi determinada conforme metodologia proposta por Tien & Kirk (1984) com leitura da absorbância em espectrofotômetro a 460 nm (ε= 29.400 M-1. cm-1). Todo o teste foi feito em triplicatas.
RESULTADOS:

No meio acrescido de glicose a atividade de LiP (46,08 U.L-1) foi 2,7 vezes menor do que o controle (125,6 U.L-1) (sem acréscimo dessa fonte de carbono). O meio com α-celulose aumentou em 65% a atividade de LiP. Nos meios com lignocelulósico (serragem de madeira) sem tratamento químico para a retirada dos "extrativos", LiP foi ligeiramente maior em comparação com aquele onde ocorreu a extração desse material. Podemos inferir que alguns desses compostos podem estar contribuindo para a síntese dessa enzima. De modo geral, todos os suplementadores contribuíram para o aumento da secreção de MnP. A menor atividade de MnP (0,83 U.L-1) ocorreu no meio acrescido de glicose embora tenha sido maior (0,38 U.L-1) do que no controle (sem essa fonte de carbono). A maior atividade ocorreu no meio acrescido com serragem de madeira de Aniba sp sem  extração dos extrativos (14,67 U.L-1), sendo 38 vezes maior em comparação com controle (sem adição dessa fonte de carbono). Atividade de MnP em meio de cultura contendo serragem de madeira de Calophyllum brasiliensis com a extração dos extrativos(13,16 U.L-1) foi 4,6 maior do que sem extrativos (2,86 U.L-1) . Aparentemente, o efeito sinergético de alguns extrativos pode contribuir para o aumento da atividade de MnP.

CONCLUSÃO:
O acréscimo de α-celulose no meio czapek-Dox contribui com aumento de 65,5% na secreção de lignina-peroxidase (LiP). A serragem da madeira de Calophyllum brasiliensis, sem extrativos, acrescida ao meio czapek-Dox aumentou em 360% a secreção de manganês-peroxidase (MnP), ao contrario da serragem de Aniba sp., com a presença de extrativos, que aumentou a secreção dessa enzima em  3.760%.  O meio de crescimento acrescidos de xilana, serragem de Calophyllum brasilienesis- com extrativo, serragem de Calophyllum brasiliensis- sem extrativos, serragem de Aniba sp. - com extrativos e Aniba sp. sem extrativo aumentaram a secreção de lignina-peroxidase (LiP) em  7,5%, 50,5%, 23,7%,  20,4% e 18,4% respectivamente.
Instituição de Fomento: CAPES, FAPEAM, UEA.
Palavras-chave: peroxidases, fungo amazônico, madeira.