Eugenia klotzschiana Berg., é uma espécie frutífera nativa do cerrado brasileiro pertencente á família Myrtaceae. É considerada uma espécie rara devido à restrita distribuição. A estrutura genética de uma espécie é essencial para o desenvolvimento de estratégias de preservação, por fornecer informações relevantes sobre o fluxo gênico entre as populações, divergência genética e sucesso reprodutivo. Os marcadores microssatélites baseiam-se na amplificação de fragmentos distribuídos no genoma entre regiões repetitivas do DNA, são co-dominantes e permitem acessar elevados níveis de polimorfismo genético. Por isso, tem sido usado com freqüência para estudos genéticos de populações naturais, podendo contribuir também para o desenvolvimento de programas de conservação. Contudo, por ser espécie-específico, o desenvolvimento destes marcadores é um processo oneroso e demorado. A proximidade evolutiva entre duas espécies permite que os pares de iniciadores sejam utilizados com sucesso em espécies pertencentes ao mesmo gênero (amplificação heteróloga ou cruzada). Neste estudo foram testados, no genoma de E. klotzschiana, sete pares de iniciadores transferidos com sucesso para Eugenia dysenterica, desenvolvidos originalmente para Eucalyptus spp.

O DNA foi extraído a partir do tecido vegetal, utilizando o protocolo CTAB, das folhas de 24 indivíduos de E. klotzschiana de uma população natural da região de Portelândia, Goiás. A quantificação do DNA foi realizada em gel de agarose 1% com o auxílio de um marcador de peso molecular. Os testes de amplificação heteróloga foram realizados com três indivíduos, para a padronização da reação em cadeia da polimerase, em cada par de iniciadores, utilizando o programa de termociclagem: desnaturação do DNA a 94ºC por 5 minutos, 30 ciclos de amplificação a 94ºC por 1 minuto, 1 minuto para o anelamento dos iniciadores (temperatura específica para cada iniciador), extensão da molécula de DNA a 72ºC por 1 minuto e a extensão da molécula a 72ºC por 7 minutos. Foram avaliadas temperaturas de anelamento que variaram entre 52ºC e 64ºC. Para os locos que apresentaram amplificação inespecífica foram testadas temperaturas de anelamento acima e abaixo da inicial, a fim de possibilitar a individualização dos alelos no loco e a obtenção dos genótipos. Os produtos da amplificação foram submetidos à eletroforese vertical em gel de poliacrilamida 6%, utilizando TBE 1X, corados com nitrato de prata. Para estimar o tamanho dos alelos foi utilizado o marcador de peso molecular 10 bp Ladder da InvitrogenTM.

 A amplificação heteróloga foi realizada com sucesso em E. klotzschiana. Dos sete iniciadores testados, cinco (Embra_210, Embra_122, Embra_73, Embra_72 e Embra_63) apresentaram bom padrão de amplificação, com capacidade de gerar fragmentos (alelos) de fácil visualização, quando submetidos à temperatura de anelamento adequada, sendo, portanto, considerados transferidos com sucesso. Nos 24 indivíduos avaliados, foi possível visualizar apenas 1 ou 2 alelos, por loco. O baixo polimorfismo encontrado provavelmente pode ser explicado pelo fato dos indivíduos pertencerem a uma única população. Além disso, como os iniciadores foram transferidos de outra espécie, espera-se um menor polimorfismo porque os locos mais conservados têm maior probabilidade de amplificação heteróloga.

Foi possível disponibilizar cinco marcadores microssatélites para E. klotzschiana. Considerando o baixo polimorfismo encontrado nos locos transferidos, torna-se necessário a obtenção de um maior número de locos polimórficos, para que estudos populacionais consistentes possam ser realizados.