62ª Reunião Anual da SBPC
C. Ciências Biológicas - 3. Bioquímica - 5. Química de Macromoléculas
ELUCIDAÇÃO ESTRUTURAL E ATIVIDADE ANTIOXIDANTE DE MANOGALACTANAS PARCIALMENTE METILADAS ISOLADAS DOS BASIDIOCARPOS DE Pleurotus sajor-caju ("Houbitake").
Cinthia Beatrice da Silva Telles 1
Elaine Rosechrer Carbonero 2
Marcelo Iacomini 3
Hugo Alexandre de Oliveira Rocha 4
1. Depto. de Bioquímica, Universidade Federal do Rio Grande do Norte - UFRN
2. Depto. de Química, Universidade Federal de Goiás - UFRG
3. Depto. De Bioquímica, Universidade Federal do Paraná - UFPR
4. Prof. Dr./Orientador - Depto. de Bioquímica - UFRN
INTRODUÇÃO:
Pesquisas sugerem que polissacarídeos são os principais compostos bioativos de vários basidiomicetos. Por outro lado, os polissacarídeos dos fungos são abundantes e apresentam variabilidade estrutural de acordo com a espécie, o que faz dos basidiomicetos uma grande fonte de obtenção de polissacarídeos bioativos. Dentre os polissacarídeos destacam-se homoglucanas e heterogalactanas e heteromananas, cujas cadeias podem ser lineares ou ramificadas e apresentarem grupos substituintes como grupos metil. Alguns destes polímeros são descritos por apresentarem atividade contra radicais livres. Estas espécies químicas são produzidas naturalmente no organismo, entretanto o acúmulo desses radicais pode promover danos a diversas moléculas no interior celular. Em muitos casos, os sistemas antioxidantes são insuficientes para prevenir danos causados pela ação desses radicais livres. Portanto, a busca por fontes naturais de compostos com ação antioxidante tem sido intensificada, e dentre eles incluem-se os polissacarídeos de fungos. Porém há poucos estudos sobre a relação estrutura e atividade biológica destas moléculas. O objetivo desse trabalho foi caracterizar estruturalmente o heteropolímero do cogumelo P. sajor-caju, bem como, avaliar a sua capacidade antioxidante.

 

METODOLOGIA:

Os basidiocarpos do cogumelo P. sajor-caju foram secos e submetidos à extração aquosa a 4°C, por 24h, após precipitação com etanol (3:1; v/v) e diálise, os polissacarídeos foram purificados através dos processos de congelamento e degelo, precipitação com solução de Fehling e diálise em membranas com diferentes limites de exclusão. A composição e quantificação monossacarídica das frações foram determinadas após redução com NaB2H4 e acetilação. Os acetatos de alditol resultantes foram analisados por cromatografia gasosa acoplada à espectrometria de massa (GC-MS) e identificados por seus respectivos tempos de retenção. Para determinar a homogeneidade das amostras foi realizada cromatografia de exclusão estérica acoplada à detecção por índice de refração e espalhamento de luz (HPSEC-MALLS). Espectros de ressonância magnética nuclear mono e bidimencionais, assim como análises de metilação foram utilizados para elucidar a estrutura do polissacarídeo obtido. As análises da capacidade antioxidante do polissacarídeo foi determinada in vitro por cinco ensaios diferentes: Capacidade antioxidante total, teste de quelação de íons metálicos, sequestro de radical hidroxila e superóxido e poder redutor.

RESULTADOS:
A fração insolúvel em Fehling, composta por manose (Man), galactose (Gal) e 3-O-metil galactose apresentou um perfil de eluição heterogêneo por HPSEC-MALLS. Após o processo de purificação foram obtidas quatro frações que se mostraram similares através das análises de RMN-13C e composição monossacarídica, sugerindo que elas podem apresentar o mesmo polissacarídeo, mas com diferentes massas molares. O espectro de HSQC apresentou sinais de C-1/H-1 correspondentes aos terminais não redutores de β-Manp e as unidades de α-Galp e 3-O-Me-α-Galp 2,6-di-O- e 6-O-substituída da cadeia principal. Através dos valores de constante de acoplamento (JC-1,H-1), foi confirmado a configuração do tipo β- para as unidades de Manp e α- para Galp e 3-O-Me-Galp. A atividade antioxidante in vitro do polissacarídeo foi primeiramente avaliada pelo ensaio de capacidade antioxidante total. O resultado revelou que atividade da manogalactana foi equivalente a 27,32 mg de ácido ascórbico/g de fração. Para atividade de quelação férrica o polímero apesar de apresentar uma atividade dose dependente, mostrou baixa atividade quelante de ferro. Alta atividade varredora de radicais superóxido e hidroxila foram observadas para a manogalactana, atingindo cerca de 50% de inibição na máxima concentração avaliada (1 mg/mL).
CONCLUSÃO:

A partir dos dados obtidos concluiu-se que os basidiocarpos de P. sajor-caju contêm similares manogalactanas, altamente ramificadas, com uma cadeia principal formada de unidades de α-Galp e 3-O-Me-α-Galp ligadas (1®6), as quais se encontram parcialmente substituídas em O-2 por terminais não redutores de β-D-Manp. Essa manogalactana apresentou baixa atividade antioxidante nos ensaios de CAT e quelação férrica. Por outro lado, mostrou excelente atividade varredora de radicais superóxido e hidroxila. A atividade seqüestradora do radical hidroxila pode ser devido a dois mecanismos: seqüestro direto do radical OH. e/ou quelação do ferro impedindo a formação desse radical. Quando se analisou a capacidade quelante do polímero, foi observado fraca atividade quelante. Esses dados levam a propor que a atividade seqüestradora de OH. é, principalmente, proveniente da ação direta sobre este radical.

Instituição de Fomento: Coordenação de Pessoal de Nível Superior - CAPES; Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico - CNPq.
Palavras-chave: Basidiomiceto, Polissacarídeo, Fungo.