62ª Reunião Anual da SBPC

C. Ciências Biológicas - 3. Bioquímica - 2. Bioquímica dos Microorganismos

ATIVIDADE OXIREDUTASE DO Pycnoporus sangineus: SECREÇÃO DE LACASE EM MEIO SUPLEMENTADO COM DIFERENTES FONTES DE CARBONO

Naimy Farias de Castro 1 Edilson Albuquerque Vieira 1 Elaine Pires Soares 1 Adriana da Silva Nunes 1 Ademir Castro e Silva 1

1. Universidade do Estado do Amazonas

INTRODUÇÃO:

Enzimas ligninolíticas têm potencial para aplicações em vários processos industriais e biotecnológicos. Tais aplicações incluem descontaminação de efluentes industriais, principalmente da industrial têxtil e petroquímica, processo de alvejamento e deslignificação na indústria de celulose e papel e na remoção de compostos fenólicos na indústria de bebidas (BALAN & MONTEIRO, 2001) e várias outras aplicações. Dentre essas enzimas encontra-se a lacase (benzenediol: oxigen oxireductase EC 1.10.3.2), que catalisa a oxidação de vários substratos com a redução de moléculas de oxigênio em água. Fungos causadores de podridão branca da madeira (white-rot fungi) são grandes secretores dessa enzima. Dentre estes encontra-se o Pycnoporus sanguineus  que vem sendo estudado nos seus vários aspectos de atividade enzimática. É necessário, entretanto, pesquisar novas fontes de carbono que possam estimular o aumento da atividade de lacase. Neste sentido, o presente trabalho teve como objetivo testar a atividade de lacase produzida pelo fungo Pycnoporus sanguineus em meio suplementado com diferentes fontes de carbono, industriais e naturais na fermentação líquida e no estado estacionário.

METODOLOGIA:

Cepa de Pycnoporus sangunieus foi coletada na zona rural do município de Manaus. Pequenos fragmentos do carpóforo foram inoculados em meio extrato de malte para posterior obtenção da cultura pura utilizada para determinação enzimática. O meio de crescimento foi composto de 3g de NaNO3, 0,5g KPO4, 0,5 mg MgSO47H2O, 0,5mg KCl e 0,01% FeSO4 7H2O e 24 mEq./l de NaNO3. O meio foi acrescido individualmente de α-celulose (Sigma-Adrich USA), xilana (Fluka Biochemika, Switzerland), dextrose anidra e serragem de madeira de Calophyllum brasiliensis e Aniba sp sem extrativos (extração com acetato de etila:etanol:água, 1:1:1). A atividade enzimática de lacase foi determinada conforme metodologia proposta por Szklarz (1989) que consiste na oxidação do substrato enzimático de seringaldazina até a sua forma quinona com leitura da absorbância em espectrofotômetro a 525 nm (ε= 65.000 M-1. cm-1). Todo o teste foi feito em triplicatas.

RESULTADOS:

A maior atividade de lacase ocorreu no meio suplementado com serragem de madeira de Aniba sp, sem extrativos, com uma atividade 77 % maior do que no meio sem esse substrato (controle = 3,80 U.L-1). Por outro lado, no meio contendo serragem da madeira de Calophyllum brasiliensis sem extrativos, a atividade foi menor (1,53 U.L-1) do que a do controle. Considerando que a espécie Aniba sp  contém células oleíferas no seu tecido xilemático é possível inferir que o fungo utilize-as na síntese da lacase. Estudos específicos, entretanto, são necessários para comprovar tal suposição. O meio suplementado com a-celulose foi o que apresentou a menor secreção de lacase (1,39 U.L-1). O acréscimo de glicose no meio inibiu parcialmente a atividade enzimática confirmando estudos anteriores de que o excesso desses açucares no meio pode inibir a secreção de lacase. A suplementação do meio com xilana contribuiu para uma secreção 3,6 vezes menor de lacase.

CONCLUSÃO:

O material lignocelulósico (madeira) com tratamento para retirada dos extrativos, ou ainda sem extração desses químicos, pode contribuir para o aumento da secreção de lacase. È necessário estudos sobre diferentes tipos de madeira que possam contribuir para o aumento da atividade de lacase considerando a quantidade e qualidade dos extrativos que possam estar inibindo ou não a secreção dessa enzima.

Instituição de Fomento: CAPES - Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior; FAPEAM - Fundação de Amparo a Pesquisa do Estado do Amazonas

Palavras-chave: Enzima Ligninolitica, Fungo Amazônico, Serragem de Madeira.