62ª Reunião Anual da SBPC

C. Ciências Biológicas - 3. Bioquímica - 6. Bioquímica

COMPOSIÇÃO QUÍMICA, ATIVIDADE ANTICOAGULANTE, ATIVIDADE ANTITROMBÓTICA E ATIVIDADE ANTIOXIDANTE DA FRAÇÃO 0,5 DA ALGA VERMELHA Hypnea musciformis

Monique Gabriela das Chagas Faustino Alves ¹
Marília Silva Nascimento ¹
Thuane de Sousa Pinheiro ¹
Maria Emília Barreto Bezerra ¹
Luciana Guimarães Alves Filgueira ¹
Edda Lisboa Leite ¹

1. Departamento de Bioquímica - Universidade Federal do Rio Grande do Norte/UFRN

INTRODUÇÃO:

A geração do coágulo de fibrina é importante para a manutenção da integridade vascular em caso de lesão endotelial. Os mecanismos hemostáticos devem ser regulados para impedir a perda excessiva de sangue e evitar a formação de trombos. A perda deste equilíbrio conduz a distúrbios hemorrágicos ou trombóticos. A superfície das células endoteliais tem atividade antitrombótica, e quando esta muda, há possibilidade de formação de trombo. Essas células produzem o heparam sulfato, que tem mostrado possuir atividade antitrombótica. As espécies reativas do oxigênio (ROS) são metabólitos fisiológicos formados durante o metabolismo celular aeróbio,que causam degradação de constituintes celulares, conduzindo a doenças, câncer, como também envelhecimento. Substâncias antioxidantes são capazes de impedir ou prevenir a oxidação de substratos celulares oxidáveis, através do seqüestro e prevenção da geração de ROS. Os polissacarídeos de algas são reconhecidamente possuidores de propriedades farmacológicas, e por essa razão, o trabalho justifica-se pela necessidade de investigar a ação de polissacarídeos da alga vermelha Hypnea musciformis na coagulação, na estimulação da síntese de heparam sulfato antitrombótico, na atividade antioxidante, além da determinação da composição química.

METODOLOGIA:

Alga Hypnea musciformis coletada no litoral sul do Estado do Rio Grande do Norte, praia de Búzios. Para extração dos polissacarídeos sulfatados, foram realizados delipidação e proteólise. Em seguida, o extrato foi fracionado com concentrações crescentes de acetona. A F0,5 foi submetida a eletroforese em gel de agarose 0,6% em tampão PDA 0,05 M, ph 9,0. Os açúcares totais foram quantificados pelo método do fenol/ácido sulfúrico, a determinação do teor de sulfato foi pelo método turbidimétrico da gelatina-bário, o conteúdo protéico foi determinado pelo método de Bradford, e a concentração de polifenóis, determinada pelo método de Folin Ciocalteau. Cromatografia de gel filtração em Sephadex G-100 para determinação da massa molecular. A atividade anticoagulante foi avaliada por kits comerciais de tempo de protrombina (PT) e tempo de tromboplastina parcial ativada (APTT) e concentrações crescentes de F0,5. A atividade antitrombótica foi avaliada pela estimulação da síntese de heparam sulfato antirombótico pelas células endoteliais em cultura. E atividade antioxidante da F0,5 foi determinada pela capacidade antioxidante total, peroxidação lipídica, seqüestro de radicais superóxido. Testes realizados em triplicata. Análise estatística realizada pela ANOVA.

RESULTADOS:

A F0,5 apresentou rendimento de 22,40%, com 72,14 ± 0,032% de açúcares totais, 32,74 ± 0,004% de sulfato, e baixa contaminação por proteínas (0,99 ± 0,003%) e por compostos fenólicos (0,15 ± 0,030%). Possui perfil eletroforético polidisperso e massa molecular de aproximadamente 75 KDa.

Os resultados do ensaio do APTT demonstraram que F0,5 tem ação anticoagulante estatisticamente significativa quando comparada com o controle (30,5 s). Com 200 µg de F0,5, o APTT foi de 77,7 ± 4,97s. A F 0,5 e o controle não apresentaram diferença estatisticamente significante no tempo de formação do coágulo avaliado pelo tempo de protrombina (p> 0,05).

Em relação à ação antitrombótica, células endoteliais em cultura tratadas com F0,5 mostraram aumento (527%) no heparam sulfato liberado para o meio quando comparadas com células não tratadas. A fração apresenta ação antioxidante pela atividade "seqüestradora" de radicais superóxidos, com inibição de 18,16 ± 0,52% a 5 mg/ml e com IC₅₀(concentração necessária para sequestrar 50% dos radicais superóxidos) de 29,77 mg/mL. A capacidade antioxidante total da fração F0,5 a 5 mg/mL foi equivalente a ação 3,04 ± 0,085 µg de ácido ascórbico. A fração (0,078mg/ml), mostrou irrisória inibição da peroxidação lipídica (2,15± 0,80%).

CONCLUSÃO:

Podemos concluir que a F0,5 de polissacarídeos sulfatados de Hypnea musciformis apresenta alto teor de açúcar e de sulfato, e baixa contaminação protéica e por compostos fenólicos. A fração possui atividade anticoagulante somente sobre a via intrínseca da coagulação demonstrada pelo alongamento do tempo de geração do coágulo avaliado pelo APTT, e atividade antitrombótica pela estimulação na síntese de heparam sulfato antitrombótico pelas células endoteliais em cultura tratadas com a fração. Possui também ação antioxidante nos modelos de seqüestro de radicais superóxido e pela capacidade antioxidante total.

Instituição de Fomento: Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico -CNPq

Palavras-chave: Alga Marinha, Hypnea musciformis, Atividade farmacológica.