62ª Reunião Anual da SBPC

C. Ciências Biológicas - 11. Morfologia - 3. Citologia e Biologia Celular

INFLUÊNCIA DO PROCESSO DE ENVELHECIMENTO NO RENDIMENTO IN VITRO DE CÉLULAS MESENQUIMAIS DA MEDULA ÓSSEA DE CAMUNDONGOS.

Fernanda Ginani ¹
Maria de Lourdes Freitas ¹
Daniele Maria Lopes Pinheiro ¹
Sérgio Adriane Bezerra de Moura ¹
Carlos Augusto Galvão Barboza ^{1, 2}

1. Departamento de Morfologia / UFRN
2. Prof. Dr./Orientador

INTRODUÇÃO:

As células mesenquimais da medula óssea constituem uma pequena população celular, contudo, podem ser expandidas com alta eficiência e induzidas a se diferenciarem em múltiplas linhagens em condições de cultura definidas. O interesse nas células mesenquimais da medula óssea cresceu nos últimos anos devido ao seu grande potencial de uso na regeneração de tecidos e órgãos lesados, como demonstrados em estudos pré-clínicos e clínicos. Todavia, a medula óssea, assim como vários outros tecidos, parece diminuir progressivamente a capacidade de adaptação e reparação tecidual ao longo dos anos. O presente trabalho teve como objetivo avaliar a influência do processo de envelhecimento sobre a capacidade de adesão e proliferação das células mesenquimais da medula óssea de camundongos, comparando-se dois grupos etários: animais jovens e animais senis.

METODOLOGIA:

A presente pesquisa foi aprovada pelo CEUA/UFRN (protocolo nº 008/2009). Foram utilizados 10 camundongos albinos machos Swiss, sendo cinco jovens (30 dias de idade) e cinco senis (18 meses de idade). Os animais foram submetidos à eutanásia e os extratos de medula óssea foram coletados do canal medular de tíbia e fêmur e cultivados em meio de cultura alfa-MEM complementado com 10% de soro fetal bovino (Cultilab, Brasil), até atingir confluência. Para avaliar a aderência e proliferação das células mesenquimais da medula óssea, estabelecendo-se uma curva de crescimento celular nos dois grupos, alíquotas contendo 1 x 10⁴ células/poço de cada grupo foram depositadas em placas de seis poços (TTP, USA) e cultivadas em três períodos de tempo: 24, 48 e 72 horas. A cada intervalo de tempo, as células foram submetidas a contagem em hemocitômetro para análise do crescimento celular. Os dados obtidos no ensaio de proliferação celular de seis amostras por intervalo em cada grupo foram submetidos a análise estatística não paramétrica, considerado-se um nível de significância de 5%.

RESULTADOS:

Os resultados demonstraram diferenças estatísticas significantes entre os grupos jovens e senis (p=0,001). A análise do crescimento celular nos diferentes grupos e intervalos de tempo mostra que houve diferença estatisticamente significativa entre os grupos jovens e senis, nos intervalos de 24 horas (jovens: 2,93±0,33; senis: 4,13±0,65; p=0,009) e 72 horas (jovens: 5,02±0,41; senis: 2,07±0,39; p=0,005). A curva de crescimento celular mostrou tendências distintas das células obtidas de animais senis, quando comparadas àquelas de animais jovens. Neste último caso, as células aumentaram em quantidade a partir de 48 horas e mantiveram o padrão de crescimento até 72 horas; diferenças estatísticas foram observadas entre os intervalos de tempo 24 e 48 horas (p=0.0047) e 24 e 72 horas (p=0.0047). Já no grupo senil, observou-se uma drástica redução no número de células no momento mais tardio do experimento (72 horas), com diferenças significativas entre os intervalos de tempo 24 e 72 horas (p=0.0048) e 48 e 72 horas (p=0.0086). Esta redução da proliferação das células de animais senis provavelmente reflete a influência de três fatores importantes e interdependentes no microambiente celular: a matriz extracelular, a ação da telomerase e o processo de senescência celular.

CONCLUSÃO:

Concluímos que a idade do animal influencia no rendimento in vitro de células mesenquimais da medula óssea, nas primeiras 72 horas de cultivo. Células obtidas de animais senis apresentaram um declínio na proliferação celular, fator este que pode influenciar negativamente o resultado de experimentos pré-clínicos que utlizem este tipo celular.

Palavras-chave: Medula óssea, Envelhecimento, Cultivo celular.