62ª Reunião Anual da SBPC
C. Ciências Biológicas - 8. Genética - 5. Genética Vegetal
CONSERVAÇÃO DE LÓCUS GÊNICOS ENTRE GENOMAS DE LEGUMINOSAS 
Leonardo Gomes de Lima 1
Vanessa Patrícia Nascimento de Souza 2
Kaliny Veiga Pessoa da Silva 3
Genialdo Ramos dos Santos 4
Sandrine Oliveira de Souza 5
Reginaldo de Carvalho 6
1. Graduando em Bacharelado em Ciências Biológicas, Depto. de Biologia,UFRPE.
2. Graduanda em Agronomia, Depto.de Agronomia,UFRPE.
3. Biol. Mestranda do Curs. de Melhoram. Genético de Plantas, Depto. de Agron,UFRPE
4. Graduando em Bacharelado em Ciências Biológicas, Depto. de Biologia,UFRPE.
5. Graduanda em Bacharelado em Ciências Biológicas, Depto. de Biologia,UFRPE.
6. Professor do Departamento de Biologia, da área de Genética,UFRPE.
INTRODUÇÃO:
Os chamados marcadores moleculares, os quais são baseados em polimorfismos que podem ser encontrados diretamente no DNA, auxiliam grandemente as pesquisas na área de genética e o melhoramento vegetal. Os polimorfismos genéticos são diferenças na seqüência do DNA entre indivíduos e podem ser gerados por modificações em apenas um par de bases ou em longas sequências repetidas ou não. Esses polimorfismos podem ser gerados por processos naturais como erros na replicação do DNA ou induzidos por agentes externos tais com viroses ou radiação solar. O presente trabalho teve por objetivo verificar a conservação em quatro loci de seqüência expressa entre nove espécies de leguminosas.
METODOLOGIA:
Para isso utilizou-se os primers ESTs do mapa de Lotus japonicus e Glycine max Leg 036, Leg 729, 11M-Gm e TC987. Amostras de DA genômico foram amplificadas nas espécies: Arachis hypogeae, Vigna unguiculata, Crotalaria mucronata, Phaseolus lunatus, Hymenaea coubaril, Caesalpinia ferrea, Bauhinia cheilantha, Phaseolus vulgaris, Cajanus cajan. A extração do DNA genômico foi realizada seguindo o protocolo de Doyle e Doyle (1990). As amplificações foram feitas em volume final de 15 µL constituída de 2,5ul de tampão 10X ; 2,5 mM de MgCl2, 0,625 µL de dNTP 10mM; 0,5 µL de primer 10 µM; 0,1 unidade de Taq e 10 ng de DNA genômico. Para PCR utilizou-se o programa Touchdown com 54°C de anelamento e os produtos de amplificação foram corados com 'Sybr Gold' e separados em gel de agarose 1,2%.
RESULTADOS:
Os primers utilizados nas reações de PCR bem como o tamanho dos fragmentos amplificados em pares de base foram dentro do esperado com tamanhos variando de 850 a 1100 pares de base. Quatro primers ESTs foram utilizados gerando produtos de PCR em oito das nove espécies de leguminosas utilizadas. Os primers amplificaram uma única banda por genótipo e revelaram polimorfismo direto entre os genótipos. Dentre os primers utilizados, o gene Leg 036 codifica a sorbitol dehydrogenase (SDH), enzima envolvida no metabolismo dos carboidratos convertendo sorbitol e frutose. O Leg 729 codifica a glicosiltransferase que converte a sacarose em isomatulose, um dissacarídeo redutor e isômero da sacarose, muito importante para a indústria de alimentos. 11M-Gm expressa proteína para polimerização de componentes fibrosos nos tecidos dos vegetais e o lócus TC987 produz uma enzima de regulação da porção 26S do proteossomo, a qual realizam importante papel na ligação proteínas ubiquitinas durante a dissociação das subunidades ribossômicas. As diferentes espécies utilizadas neste trabalho reforçam a eficiência deste método na localização de sequências gênicas entre genomas de diferentes grupos taxonômicos. Os dados obtidos, mediante a metodologia utilizada, revelaram que existe grande conservação sintênica para a maioria das espécies utilizadas.
CONCLUSÃO:

A presença de um único produto amplificado entre as espécies sugere fortemente, que os fragmentos amplificados correspondem a lócus gênicos hortólogos, mesmo quando observado polimorfismo de comprimento dos fragmentos.

Instituição de Fomento: Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico-CNPq
Palavras-chave: Polimorfismo, Sintenia, ESTs.