62ª Reunião Anual da SBPC

C. Ciências Biológicas - 2. Biologia - 3. Biologia Geral

REFORMULAÇÃO DO PROTOCOLO PARA ISOLAMENTO DE CLOROPLASTOS COMO DEMONSTRAÇÃO PRÁTICA DO FRACIONAMENTO CELULAR

Thiago Barros Galvão 1 Leonardo Emmanuel Fernandes de Carvalho 1 Diana Aline Nôga Morais Ferreira 1 Natânia Carol Cavalcante Rezende 1 Delando Nasário de Medeiros 1 Eduardo Luiz Voigt 1

1. (Depto. de Biologia Celular e Genética, UFRN)

INTRODUÇÃO:

A Biologia Celular e Molecular é uma disciplina básica para todos os cursos de graduação em Ciências Biológicas, Agrárias, Ambientais e da Saúde. O conteúdo programático desta disciplina aborda conceitos sobre a estrutura e o funcionamento celular, os quais fundamentam os alunos para o desenvolvimento de competências e habilidades em áreas específicas. O aspecto microscópico e reducionista da Biologia Celular e Molecular consiste em uma dificuldade para o processo de ensino-aprendizagem (Orlando et al., 2009). Dentre os instrumentos didáticos disponíveis, as aulas práticas podem ser empregadas para a abordagem eficiente de conceitos abstratos, tornando o conteúdo mais atrativo, envolvente e concreto (Carneiro e Silva, 2007). A técnica de isolamento de cloroplastos por centrifugação tem sido utilizada em aulas práticas de Bioquímica e Fisiologia Vegetal para a demonstração da reação de Hill, ilustrando o processo de fotossíntese (Passos, 1996). Este trabalho almeja reformular o protocolo estabelecido para demonstrar a técnica de fracionamento celular em aulas práticas de Biologia Celular e Molecular. Além de ilustrar uma técnica essencial para o estudo das organelas celulares, este protocolo pode propiciar aos alunos o desenvolvimento de habilidades em laboratório importantes para o exercício profissional futuro.

METODOLOGIA:

O modelo experimental utilizado foram folhas de espinafre (Spinacea oleracea), devido à fácil obtenção, riqueza de cloroplastos e fácil manipulação. O protocolo foi desenvolvido em três passos básicos, incluindo a obtenção do extrato, o fracionamento por centrifugação e a preparação de lâminas. As folhas foram lavadas com água destilada, secas suavemente em papel toalha e cortadas com bisturis em fragmentos pequenos. Em seguida, 8-10 g deste material foi disposto em gral de porcelana e macerado com pistilo em 20 mL de sacarose 0,5 M por 5 min e o homogeneizado foi filtrado em gaze. O filtrado foi dividido em dois tubos de centrífuga e foi centrifugado a 200 xg por 15 min. O primeiro sobrenadante foi transferido para outros dois tubos e foi centrifugado a 1.000 xg por 7 min. O segundo sobrenadante obtido foi descartado e o segundo precipitado foi ressuspedido em 5 mL de sacarose 0,5 M. Finalmente, lâminas foram montadas a partir do primeiro precipitado, do segundo sobrenadante e do segundo precipitado ressuspedido. Com uma pipeta, duas gotas do material foram depositadas em lâmina, cobertas com lamínula e então observadas ao microscópio óptico.

RESULTADOS:

O protocolo reformulado neste trabalho consiste em uma alternativa simples e acessível para demonstrar a técnica de fracionamento celular em aulas práticas de Biologia Celular e Molecular. Além de utilizar materiais de fácil obtenção, como folhas de espinafre e solução de sacarose, este protocolo emprega procedimentos pouco laboriosos e equipamentos simples, como centrífuga de baixa rotação e microscópio óptico, para demonstrar os fundamentos e a eficiência da técnica. A realização de uma aula prática baseada neste protocolo permite ao aluno aprender os procedimentos de extração de organelas, centrifugação preparativa e centrifugação fracionada. Ao protocolo previamente estabelecido, foi agregada a montagem e a visualização de lâminas a partir de frações obtidas durante o fracionamento, ilustrando a validade da centrifugação preparativa na eliminação de fragmentos celulares e a eficiência da técnica pela visualização da fração enriquecida em cloroplastos.

CONCLUSÃO:

Esta iniciativa demonstra que protocolos previamente estabelecidos podem ser reformulados para ilustrar técnicas básicas em Biologia Celular e Molecular. A reformulação de protocolos visando simplificação e acessibilidade é de suma importância para contribuir com a melhoria da qualidade de ensino, especialmente em instituições que dispõem de poucos recursos financeiros.

Instituição de Fomento: Pró-reitoria de Graduação da Universidade Federal do Rio Grande do Norte/ PROGRAD/UFRN

Palavras-chave: Aulas práticas, Biologia Celular e Molecular, Fracionamento celular.