62ª Reunião Anual da SBPC
C. Ciências Biológicas - 2. Biologia - 3. Biologia Geral
PADRONIZAÇÃO DE MÉTODO RÁPIDO PARA TRIAGEM DA PRESENÇA DE ANATOXINA-A(S) EM ÁGUA
Camila de Souza Xavier 1
Vanessa da Silva Santos 2
Maristela Case Costa Cunha 3
Renato José Reis Molica 4
Eduardo José Alécio de Oliveira 1
1. IFPE - Campus Recife - Curso Técnico em Química Industrial
2. UNICAP - Licenciatura em Ciências Biológicas e Saúde
3. ITEP - Laboratório de Ecofisiologia de Microalgas e Microbiologia
4. UFRPE - Unidade Acadêmica de Garanhuns
INTRODUÇÃO:

A anatoxina-a(s) é uma neurotoxina produzida pelo gênero de cianobactérias Dolychospermum que age como um inibidor natural irreversível da enzima acetilcolinesterase - AChE (Rodrigues et al., 2006). Os sinais de envenenamento por esta toxina em animais selvagens e domésticos  incluem desequilíbrio, fasciculação muscular pós-morte, respiração ofegante e convulsões. A morte é devida à parada respiratória e ocorre de poucos minutos a poucas horas, dependendo da dosagem e consumo prévio de alimento (CARMICHAEL, 1994). O relato da presença de florações com anatoxina-a(s) tem aumentado nos últimos anos (DEVIC et al., 2002; MOLICA et al., 2005; BECKER et al., 2009), e a obtenção de método rápido e padronizado de triagem em amostras de água faz-se necessário. O objetivo deste trabalho foi estabelecer um método enzimático rápido, de fácil execução e confiável para ser utilizado na detecção de anatoxina-a(s) em amostras de água através da inibição da acetilcolinesterase.

METODOLOGIA:

Amostras de Dolychospermum oumiana (ITEP 025), produtora de anatoxina-a(s) (DÖRR et al., 2010), e de Cylindrospermopsis raciborskii (Jabali), não tóxica (BERNARD et al., 2003), foram cultivadas em meio ASM-1, liofilizadas e utilizadas como padrão positivo e negativo de inibição da AChE, respectivamente. Os métodos de extração/análise de BARROS, et al. (2004) (Método 1) e MOLICA et al. (2005) (Método 2) foram comparados inicialmente. Como método rápido a ser padronizado (Método 3), foi realizado uma modificação da técnica de BECKER et al. (2009),  através da extração direta a partir  de 25 mg do liofilizado em água pH 3,3, seguido de sonicação e centrifugação. O ensaio de inibição da AChE baseou-se em ELMAN et al.,(1961) e utilizou-se o iodeto de propioniltiocolina como substrato.

RESULTADOS:

A padronização de método para análise de florações de cianobactérias produtoras de anatoxina-a(s) é essencial, de forma a evitar resultados falsos positivos ou negativos. A análise da cultura Jabali mostrou inibição da AChE de 16% e 47% frente aos Métodos 1 e 2, respectivamente, caracterizando falsos positivos. A extração em água pH 3,3 não apresentou falsos positivos com amostras da cepa Jabali (0% de inibição) e mostrou 100% de inibição quando utilizou-se a cepa produtora de anatoxina-a(s), semelhante ao obtido com os métodos 1 e 2.

CONCLUSÃO:

Os métodos 1 e 2 apresentaram resultados falso positivos ao avaliar uma cultura de cianobactérias não produtora de anatoxina-a(s) (Jabali), enquanto o Método 3, com extração em água pH 3,3, não apresentou interferência. O método proposto mostrou igual inibição enzimática (100%), comparando-se aos métodos 1 e 2 para avaliação de cepa produtora de anatoxina-a(s).

Instituição de Fomento: CNPq, Processo nº. 410736/2006-6; Fundação de Amparo à Ciência e Tecnologia do Estado de Pernambuco - FACEPE - Programa PIBIC Jr.
Palavras-chave: Anatoxina-a(s), Cianobactérias, Acetilcolinesterase.