62ª Reunião Anual da SBPC

C. Ciências Biológicas - 3. Bioquímica - 5. Química de Macromoléculas

ESTRUTURA E ATIVIDADE ANTICOAGULANTE/ ANTITROMBÓTICA DE UM COMPOSTO TIPO CONDROITIM SULFATO ISOLADO DO CARANGUEJO Goniopsis cruentata

Airton Araújo de Souza Júnior 1, 3 Helena Bonciani Nader 2 Raquel Helen Brito de Araujo 1 Rayani Umbelino Reis 1 Suely Ferreira Chavante 1 Giulianna Paiva Viana de Andrade Souza 1

1. Universidade Federal do Rio Grande do Norte -UFRN 2. Universidade Federal de Sao Paulo -UNIFESP 3. Instituto Federal do Rio Grande do Norte -IFRN

INTRODUÇÃO:

Condroitim sulfato (CS) é um glicosaminoglicano formado por resíduos alternados de beta-N-acetilgalactosamina e beta-D-glucurônico. Esses polissacarídeos ocorrem em tecidos animais geralmente covalentemente ligados a uma proteína na forma de proteoglicanos (CS-PGs). CS-PGs são componentes onipresentes da matriz extracelular do tecido conjuntivo, e também são encontradas na superfície de muitos tipos de células e, em grânulos de secreção intracelular. Devido à presença de grupos sulfato em quantidades diferentes, localizados em posições diferentes (2 e 3 do ácido urônico, e 4 e 6 de resíduos de N-acetil-galactosamina), CS apresentam uma grande variabilidade estrutural que pode ser a base para a sua diversidade funcional. Assim, devido à grande heterogeneidade dos CS, uma avaliação rigorosa da estrutura e propriedades, tais como a massa molecular, densidade de carga e as posições dos grupos sulfato, é de fundamental importância principalmente para aplicações farmacológicas. O presente trabalho relata o isolamento e caracterização estrutural de um composto tipo condroitim sulfato naturalmente obtido do caranguejo Goniopsis cruentata e a determinação de sua atividade anticoagulante/antitrombótica.

METODOLOGIA:

Os compostos tipo condroitim sulfato foram isolados dos tecidos do caranguejo Goniopsis cruentata após proteólise, cromatografia de troca iônica, fracionamento com volumes crescentes de acetona e caracterizados por eletroforeses em géis de agarose no tampão 1,3 diaminopropano acetato 0,05M, pH 9,0 e poliacrilamida tampão barbital sódico 0,06 M, pH 8,6, análises enzimáticas e de Ressonância Nuclear Magnética. A atividade anticoagulante in vitro foi determinada pelos ensaios de tempo de tromboplastina parcial ativada (aPTT), tempo de trombina (TT), tempo de protrombina (PT) e HEPTEST. A atividade antitrombótica foi determinada, utilizando o modelo in vivo de ligadura da veia cava e de indução da síntese de heparam sulfato antitrombótico em células endoteliais de aorta de coelho (RAEC).

RESULTADOS:

O composto tipo condroitim sulfato isolado do caranguejo Goniopsis cruentata apresentou massa molecular média de 10,7 kDa e mostrou migração eletroforética intermediária entre os padrões de condroitim sulfato e dermatam sulfato em gel de agarose. As análises enzimáticas e de Ressonância Nuclear Magnética mostraram que sua estrutura apresenta predominantemente dissacarídeos com sulfato na posição 4 da galactosamina, característicos de condroitim 4-sulfatado de mamíferos. Além disso, a ausência de ácido idurônico evidencia que esse composto não apresenta estrutura semelhante ao dermatam sulfato, embora migre eletroforeticamente como o dermatam sulfato de mamíferos. Adicionalmente, o composto tipo condroitim sulfato mostrou baixa atividade anticoagulante in vitro através dos ensaios de aPTT, PT, HEPTEST e TT, quando comparado com heparinas de mamíferos. Entretanto, esse composto apresentou uma elevada atividade antitrombótica usando o modelo in vivo de ligadura da veia cava. Quando as células endoteliais de aorta de coelho (RAEC) foram expostas a tal composto, observou-se um aumento da síntese de cadeias de heparam sulfato, sugerindo que a atividade antitrombótica in vivo pode estar relacionada, em parte, ao estímulo da síntese desse heparam sulfato.

CONCLUSÃO:

O composto tipo condroitim sulfato isolado dos tecidos do caranguejo Goniopsis cruentata apresentou massa molecular média de 10,7kDa e semelhança estrutural ao condroitim 4-sulfatado de mamíferos. Tal composto mostrou baixa atividade anticoagulante in vitro através dos ensaios de aPTT, PT, HEPTEST e TT, quando comparado com heparinas de mamíferos. O composto tipo condroitim sulfato também apresentou elevada atividade antitrombótica in vivo no modelo de ligadura da veia cava, o que pode estar relacionada à sua ação na indução da síntese de heparam sulfato antitrombótico em células endoteliais de aorta de coelho (RAEC).

Instituição de Fomento: CNPq

Palavras-chave: Goniopsis cruentata , Condroitim sulfato , Antitrombótico.