62ª Reunião Anual da SBPC
C. Ciências Biológicas - 3. Bioquímica - 5. Química de Macromoléculas
CARACTERIZAÇÃO ESTRUTURAL DO HEPARAM SULFATO DO CAMARAO CINZA Litopenaeus vannamei E AVALIAÇÃO DE SEU EFEITO SOBRE A HEMOSTASIA E A PROLIFERAÇÃO DE CÉLULAS TUMORAIS
Fernanda Marques de Azevedo 1
Dayse Santos Arimateia 1
Raquel Helen Brito de Araújo 1
Ana Katarina Menezes da Cruz 1
Rômulo dos Santos Cavalcanti 1
Suely Ferreira Chavante 1
1. Depto. de Bioquímica, Centro de Biociências - UFRN
INTRODUÇÃO:

O Heparam Sulfato, polissacarídeo sulfatado da família dos glicosaminoglicanos, é encontrado essencialmente em todos os tecidos sob a forma de diferentes tipos de proteoglicanos. Devido suas características estruturais e sua ampla distribuição na superfície celular, na matriz extracelular e na membrana basal, o Heparam Sulfato está envolvido em vários fenômenos biológicos, como morfogênese, crescimento/desenvolvimento celular e homeostase, e é capaz de participar de diversas condições patológicas como inflamação, metástase e angiogênese. Por causa desta grande versatilidade funcional, o Heparam Sulfato vem sendo alvo de pesquisa em diversos estudos que partem desde a definição precisa de sua estrutura até o seu envolvimento em diferentes processos biológicos importantes.  Portanto, a proposta do presente trabalho é caracterizar o Heparam Sulfato extraído do cefalotórax (cabeça) do camarão cinza Litopenaeus vannamei, um invertebrado marinho que representa um dos principais produtos de exportação do Rio Grande do Norte, e avaliar seu potencial anticoagulante, antihemostático e antiproliferativo. Esses estudos poderão contribuir para o desenvolvimento de novos agente terapêuticos.

METODOLOGIA:
O heparam sulfato do camarão (CTH) foi obtido após extração dos glicosaminoglicanos, seguida pelo fracionamento com diferentes proporções de acetona (0,5:1; 0,7:1 e 1:1 v/v) e purificação das frações por cromatografia de troca-iônica em DEAE-sephacel através de eluições com molaridades crescentes de cloreto de sódio (0,5; 0,7; 1,0 Molar), seguida de cromatografia de gel filtração em Sephadex G-25. A atividade anticoagulante do CTH foi realizada através dos ensaios do Tempo de Tromboplastina Parcial Ativada (APTT) de acordo com as especificações do kit. Para verificar o efeito hemorrágico do CTH foi utilizado o método de escarificação em cauda de rato. Para a avaliação da proliferação celular, a viabilidade das células HeLa foi medida pelo método do MTT [brometo de 3-(4,5-dimetiltiazol-2-il)-2,5-difeniltetrazolio] que se baseia na redução deste sal por proteinases mitocondriais ativas apenas em células viáveis.
RESULTADOS:

O Heparam Sulfato purificado da cabeça de camarão (CTH) apresentou, em diferentes sistemas de tampões, um comportamento eletroforético atípico, migrando entre os padrões de heparam sulfato (HS) e dermatam sulfato. A diferença de migração entre o CTH e o padrão de HS sugere variações no grau de sulfatação entre esses compostos.  Os resultados das avaliações do efeito do CTH sobre os eventos da hemostasia revelaram que este composto apresenta um baixo potencial anticoagulante, pelo ensaio do APTT, e um reduzido efeito anti-hemostático, no modelo de escarificação em cauda de rato. Tais resultados demonstram que o CTH não altera o equilíbrio hemostático, podendo servir como um modelo experimental atraente para o estudo de seu efeito em outras atividades biológicas, onde o risco hemorrágico é desvantajoso. Por esta razão, foi investigado o efeito do CTH sobre a modulação da proliferação de células tumorais humanas (HeLa). Em todas as concentrações testadas, o CTH reduziu em torno de 50% a proliferação celular. Na menor concentração utilizada (0,1ug/mL), o CTH teve um significante efeito anti-proliferativo, comparado aos padrões de heparina e HS. Esses resultados demonstram que os estudos com o CTH poderão abrir novas perspectivas para o desenvolvimento de agentes terapêuticos.

CONCLUSÃO:

O composto tipo Heparam Sulfato do camarão (CTH) apresentou efeito anti-hemostático e anticoagulante reduzidos em comparação à heparina padrão. Por ser um composto que inibe a proliferação de células tumorais de maneira significativa, o composto extraído do camarão cinza Litopenaues vannamei pode servir como um modelo estrutural interessante para ampliar os estudos do uso alternativo da heparina como agente antimetastático.

Instituição de Fomento: Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico -CNPq
Palavras-chave: Litopenaeus vannamei, Heparam sulfato, Células tumorais.