62ª Reunião Anual da SBPC

C. Ciências Biológicas - 10. Microbiologia - 2. Microbiologia Aplicada

ATIVIDADE COAGULANTE DE EXTRATOS DE Aspergillus spp. DA COLEÇÃO DE CULTURAS DPUA OBTIDOS POR FERMENTAÇÃO SUBMERSA

Andréa Cristiane Fischborn 1 Rosana Antunes Palheta 1 Larissa de Souza Kirsch 1 Luis Carlos Moreira 1 Maria Francisca Simas Teixeira 1, 3 Valéria de Carvalho Santos Ebinuma 2

1. Coleção de Cultura DPUA, ICB, Universidade Federal do Amazonas/UFAM 2. Faculdade de Ciências Farmacêuticas, Universidade de São Paulo - USP 3. Dra. / Orientadora

INTRODUÇÃO:

Atualmente as proteases microbianas representam aproximadamente 60% das vendas mundiais de enzimas com diversos tipos de aplicações industriais, inclusive na área de alimentos no processo de coagulação enzimática do leite visando à produção de alguns tipos de queijo. A obtenção de enzimas com alto poder coagulante para o leite é um dos principais fatores de busca por novas linhagens microbiana produtoras de enzimas, pois contribui com a redução dos custos e aumenta a oferta para a indústria de laticínios. Por isso, os microrganismos representam uma fonte atrativa de protease por poderem ser cultivados em grandes quantidades, em um tempo relativamente curto, por métodos estabelecidos de fermentação. Estas proteases têm uma vida prolongada e quando armazenadas sob condições ideais apresentam baixa perda de atividade coagulante. A escolha do agente coagulante é fundamental para o processo de coagulação do leite na obtenção de queijo, pois as enzimas do agente coagulante influenciam tanto no processo de coagulação, como na maturação do queijo, dependendo da atividade proteolítica das enzimas. Assim, o objetivo deste trabalho foi testar a atividade coagulante de dez extratos de Aspergillus spp. obtidos por fermentação submersa.

METODOLOGIA:

Culturas de dez espécies de Aspergillus spp. da Coleção de Culturas DPUA/UFAM foram reativadas em meio CYA por 7 dias a 25°C. Desses subcultivos preparou-se o inóculo, os quais foram mantidos nas mesmas condições de reativação. Em seguida, 5 discos miceliais (Ø=1cm) das culturas foram transferidos para frascos de Erlenmeyers (125 mL) contendo 30 mL de CYA líquido. A fermentação foi conduzida em agitador orbital a 150 rpm, 30 °C por 5 dias e o extrato bruto foi separado por filtração à vácuo. Para atividade coagulante foi utilizado como substrato o leite em pó desnatado a 10% (p/v) dissolvido em CaCl2 0,05 M, pH 5,8 a 50 ºC por 15 minutos. Desta solução, 5 mL foram transferidos para tubos de ensaio acrescentando-se 0,5 mL do extrato bruto. O início da coagulação foi acompanhado com um cronômetro observando-se periodicamente a formação macroscópica de pequenos coágulos na parede dos tubos de ensaio pela rotação manual do tubo e o tempo foi registrado em segundos. A força do coagulante (F) foi definida como a quantidade de enzima que coagula 1,0 mL de leite em 40 minutos a 50 ºC, de acordo com a seguinte fórmula: F= L x 2.400/c x t, onde: L=o volume de leite utilizado (mL), c=a quantidade de coagulante adicionada (mL) e t=o tempo de coagulação em segundos.

RESULTADOS:

Os resultados mostraram que todos os extratos testados apresentaram atividade coagulante no leite em pó desnatado, com média de 466 U/mL. A maior atividade foi observada nos cultivos de Aspergillus niger DPUA 1423 (2400 U/mL), que classificado no mesmo grupo do Aspergillus niger var. awamori, comercialmente utilizado desde a década de 90 como fonte de coagulante desenvolvido a partir da engenharia genética. Em relação as demais espécies: Aspergillus ficum DPUA 1422, A. flavo-furcatis DPUA 1449, A. flavo-furcatis DPUA 1451, A. flavo-furcatis DPUA 1465, A. niger DPUA 1471, A. flavus DPUA 1452, A. flavo-furcatis DPUA 1463, A. foetidus DPUA 1477, ainda não foram citados registros como fonte de enzimas coagulantes. Estes novos registros são de grande importância para indústria de laticínios que buscam novos coagulantes em substituição ao uso do quarto estômago de bezerros (coalho), considerando-se que os coagulantes microbianos apresentam atividade proteolítica mais acentuada.

CONCLUSÃO:

Com os dados obtidos concluiu-se que os extratos das espécies de Aspergillus da Coleção de Culturas DPUA/UFAM são potenciais fontes de proteases coagulantes do leite, além disso, também revela a importância do papel das coleções de cultura na preservação de espécies microbianas produtoras de biocompostos com interesse econômico e ecológico.

Instituição de Fomento: FAPEAM, CAPES E CNPq

Palavras-chave: Aspergillus spp., Atividade coagulante, Fermentação submersa.