62ª Reunião Anual da SBPC

A. Ciências Exatas e da Terra - 4. Química - 3. Química Analítica

SEQUENCIAMENTO DE UM CICLOPENTAPEPTÓIDE POR ESPECTROMETRIA DE MASSA

Angélica Maria de Morais Lima 1 Otilie Eichler Vercillo 2 Carlos Kléber Zago de Andrade 2 Ricardo Bastos Cunha 3

1. Laboratório de Química Bioanalítica, Instituto de Química, UnB 2. Lab. de Química Metodológica e Orgânica Sintética, Instituto de Química, UnB 3. Prof. Dr. / Orientador - Instituto de Química - UnB

INTRODUÇÃO:

Peptóides são oligômeros de glicina N-substituída que não são encontrados na natureza. Diferentemente dos peptídeos, eles têm, em sua estrutura, a cadeia lateral dos aminoácidos ligada ao nitrogênio e não ao carbono alfa, não possuindo, portanto, centros estereogênicos na cadeia principal. Essa alteração estrutural melhora a bioatividade orgânica do composto quando comparado com o correspondente peptídeo, por ser capaz de atuar como ligante de proteínas, em alguns casos com alta afinidade. O sequenciamento de peptóides tem sua importância na determinação da estrutura para o reconhecimento de suas propriedades e mecanismos de ação com vistas à utilização em farmacologia, já que esses compostos apresentam uma variedade de atividades biológicas importantes e estabilidade proteolítica. Peptóides cíclicos são ainda mais interessantes, pois possuem algumas vantagens decorrentes da substituição do nitrogênio associada à baixa flexibilidade conformacional da estrutura cíclica, o que aumenta a afinidade aos domínios protéicos. Neste trabalho, a espectrometria de massa por tempo de vôo com ionização por dessorção a laser auxiliada por matriz (MALDI-TOF/TOF) foi utilizada para determinação de pureza e sequenciamento de um ciclopentapeptóide isolado por cromatografia.

METODOLOGIA:

O isolamento do peptóide foi feito por HPLC em fase reversa, utilizando uma coluna de marca Vydac C18 e um gradiente de TFA 0,1% em água Milli-Q e acetonitrila (ACN) como fase móvel. Os experimentos foram conduzidos em um espectrômetro de massa por tempo de vôo modelo Autoflex II TOF/TOF da Bruker Daltonics (Bremen, Alemanha). Para a calibração, foi utilizada uma mistura-padrão comercial denominada PepMix. Para o preparo da solução concentrada de matriz (solução 1) 1 µL de TFA 0,1% foi dissolvido em 1 mL de água Milli-Q e, para a solução diluída (solução 2), foram dissolvidos 20 µL de ACN 50% em 20 µL da solução 1. O método de aplicação de matriz seguido foi o dried-droplet, no qual 1 µL de amostra e 1 µL da solução de matriz (solução 2) são aplicados conjuntamente no poço da placa de MALDI. Para ressuspender a amostra, foram utilizados 20 µL da solução 1.

RESULTADOS:

O ciclopentapeptóide C25H42N6O9 (M=570,6 g/mol) apresentou nove picos significativos na separação por cromatografia. Todas as alíquotas foram aplicadas na placa do MALDI e submetidas à espectrometria de massa (MS). O espectro de MS da alíquota 6 teve como resultado um pico de 571.3 u (M+H)+, o que confirma a presença do ciclopentapeptóide. Este pico foi submetido a MS/MS e apresentou os seguintes picos significativos 571,0 u, 513,7 u, 342,6 u, 285,5 u e 173,4 u.

CONCLUSÃO:

Os resultados obtidos demonstram que as tradicionais séries iônicas não se aplicam no caso de um peptóide cíclico, devido ao fato deste possuir as cadeias laterais dos aminoácidos ligadas ao nitrogênio em vez do carbono alfa. O sequenciamento da amostra comprovou a estrutura do peptóide cíclico e a sequência de fragmentação.

Instituição de Fomento: CNPq

Palavras-chave: Espectrometria de massa, MALDI-TOF/TOF, Peptóide.