No primeiro experimento, a alteração de osmolalidade no meio de lavagem (TCM199; 2ml) mantido em placas de 35mm sobre placa térmica (39°C), na presença ou não de uma camada de óleo de silicone (2ml), foi avaliada a cada 15 minutos, durante 4 horas. Em um segundo experimento, a osmolalidade foi avaliada durante o período de maturação após 0, 6, 12, 18 e 24h de incubação. Os sistemas de cultivo foram: placas de quatro poços contendo 400µl de meio em cada poço na presença (Grupo Nunc água) ou ausência de água (Grupo Nunc) no orifício central e placas de quatro poços contendo 400µl de óleo sobre o meio (Grupo Nunc óleo). A osmolalidade no sistema de cultivo tradicional (gotas de 200µl de meio cobertas com óleo em placas de 60mm) também foi avaliada. Finalmente, testou-se o efeito das alterações de osmolalidade durante a lavagem dos oócitos e diferentes etapas da produção in vitro sobre as taxas de clivagem e desenvolvimento embrionário.

A osmolalidade do meio de lavagem na presença ou ausência de óleo não sofreu alterações significativas durante os primeiros 45 minutos sobre a placa térmica (P>0,05). A partir deste período, a presença de óleo é imprescindível para manter a osmolalidade constante. A presença de água no orifício central de placas de quatro poços, durante o período de maturação, manteve a osmolalidade no mesmo padrão que a adição de uma camada de óleo, sendo a osmolalidade final do meio similar à observada no sistema convencional (294 mOsm kg^-1; P>0,05). Entretanto, a partir de 12 horas de incubação, a osmolalidade foi significativamente superior no meio mantido na ausência de água ou óleo. Nas condições deste estudo, não houve diferença significativa nas taxas de clivagem e desenvolvimento embrionário quando oócitos foram cultivados sob óleo (33% blastocisto) ou em placas contendo água no orifício central (29,7 e 29,9% blastocisto; P>0,05).  

A manutenção do equilíbrio osmótico, e as taxas de desenvolvimento embrionário, confirmam que a adição de água no orifício central de placas de quatro poços é uma excelente alternativa para substituir sistemas com óleo, pois além de facilitar o manuseio, ainda elimina problemas que possam vir a interferir nos resultados. O uso de uma camada de óleo sobre o meio de lavagem é necessário se os oócitos permanecerem mais de 45 minutos sobre a placa térmica, para evitar prejuízos nas  taxas de desenvolvimento embrionário.