62ª Reunião Anual da SBPC

C. Ciências Biológicas - 3. Bioquímica - 1. Biologia Molecular

CONSTRUÇÃO DE ADENOVÍRUS RECOMBINANTES COMO CANDIDATOS VACINAIS E AGENTES ANTIVIRAIS PARA O CONTROLE DA CIRCOVIROSE SUÍNA

Mikael Menezes Motta Soares 1 Orlando Chiarelli Neto 1 Pedro Marcus Pereira Vidigal 1 Mauro Pires Moraes 2 Abelardo Silva Júnior 3 Márcia Rogéria de Almeida Lamêgo 4

1. Depto. de Bioquímica e Biologia Molecular, UFV 2. Plum Island Animal Disease Center, PIADC/USDA, USA 3. Depto. de Veterinária, UFV 4. Profa. Dra./Orientadora - Depto de Bioquímica e Biologia Molecular, UFV

INTRODUÇÃO:

O Porcine circovirus-2 (PCV-2) é o principal agente causador da Síndrome Multisistêmica do Definhamento dos Suínos (SMDS) e está associado a diferentes síndromes em suínos. A proteína do capsídeo viral do PCV-2 representa o principal alvo para o sistema imune do suíno, consistindo em um antígeno interessante para o desenvolvimento de candidatos vacinais. Nesse sentido, o objetivo deste trabalho foi produzir adenovírus recombinantes que expressam a proteína do capsídeo do PCV-2 e verificar a expressão in vitro desta proteína.

METODOLOGIA:

Células da linhagem HEK293 foram transfectadas com o sistema de expressão gênica em adenovírus que expressa a proteína do capsídeo do PCV-2 (pAd5-ORF2), previamente linearizado pela enzima PacI. O adenovírus recombinante (Ad5-ORF2) foi multiplicado nas células HEK293 e purificado utilizando ultra-centrifugação em gradiente de cloreto de césio e diálise. A expressão da proteína viral in vitro foi confirmada pelos ensaios de imunoperoxidase em monocamada de células (IPMA), Western blotting e imunofluorescência (IFA).

RESULTADOS:

A partir dos ensaios de Western blotting e IPMA, foi possível detectar a expressão da proteína viral em cultura de células HEK 293 infectadas com o adenovírus recombinante purificado. Estes resultados indicam que o sistema de expressão é funcional, sendo capaz de expressar a proteína do PCV-2. O título do adenovírus recombinante purificado foi de 2x108 TCID50/50µL. A partir do ensaio de IFA, foi possível detectar a expressão da proteína do capsídeo viral do PCV-2 em cultura de células HEK 293 infectadas com o adenovírus recombinante purificado.

CONCLUSÃO:

Os resultados obtidos neste trabalho mostram que o adenovírus recombinante (Ad5-ORF2) é capaz de infectar as células e expressar a proteína do capsídeo do PCV-2 in vitro. A expectativa é que, a partir deste adenovírus recombinante, seja produzida uma vacina que contribua para o controle eficiente da infecção pelo PCV-2 no Brasil.

Instituição de Fomento: FAPEMIG e CNPq

Palavras-chave: porcine circovirus-2, adenovírus recombinante, vacina recombinante.