63ª Reunião Anual da SBPC

C. Ciências Biológicas - 3. Bioquímica - 2. Bioquímica dos Microorganismos

ISOLAMENTO E CARACTERIZAÇÃO BIOQUÍMICA E FISIOLÓGICA DE BACTÉRIAS DO GÊNERO Rhizobium OBTIDAS DE NÓDULOS DE ADUBOS VERDES

Ailton Júnio Cantuária de Oliveira 1 Bruna Pereira Barros 1 Marilia Gabriela Chaveiro 1 Thiago Pires Souto 1 Enderson Petrônio Brito Ferreira 2 Claudia Cristina Garcia Martin Didonet 3

1. Aluno do Curso de Farmácia, Universidade Estadual de Goiás, Anápolis, GO – UEG 2. Pesquisador Dr. Embrapa Arroz e Feijão, Santo Antônio de Goiás, GO 3. Profa. Dra./Orientadora, Universidade Estadual de Goiás, Anápolis, GO

INTRODUÇÃO:

A utilização da fixação biológica de nitrogênio (FBN) em plantas da família Fabaceae (leguminosas) tem se intensificado por favorecer uma boa produtividade nas culturas além de diminuir o aporte de fertilizantes nitrogenados, que aumenta os custos de produção e contribui para poluição ambiental. Uma boa alternativa tecnológica para o cultivo de entressafra é a utilização da adubação verde com leguminosas inoculadas com bactérias fixadoras de N, apresentando como vantagens a cobertura do solo, evitando lixiviação, além de contribuir para a ciclagem de nutrientes como carbono e nitrogênio. Bactérias, como as da família Rhizobiaceae, podem contribuir para a FBN sendo utilizada como inoculantes nestas plantas, podendo favorecer o aumento da massa verde e contribuir para a eficiência da tecnologia. O isolamento de rizóbios de diferentes habitats e plantas hospedeiras que atuem na FBN pode contribuir na obtenção de bactérias mais eficientes para serem utilizados na agricultura. A caracterização bioquímica e genética de rizóbios pode favorecer os programas de seleção e posterior formulação de inoculantes para estas plantas. O trabalho teve como objetivo a caracterização bioquímica de bactérias da família Rhizobiaceae, isoladas de nódulos de crotalária, feijão-de-porco, guandu e mucuna.

METODOLOGIA:

Solos de 3 municípios goianos (Porangatú, Rio Verde e Santo Antônio de Goiás) foram utilizados para confecção de vasos e cultivo de mucuna (Mucuna aterrima), guandu (Cajanus cajan), feijão-de-porco (Canavalia ensiformis) e crotalária (Crotalaria juncea), utilizadas como plantas iscas. Estas foram cultivadas nos vasos até a floração e os nódulos formados nas raízes foram coletados. Os nódulos foram desinfetados superficialmente e macerados em grall (1:10) em água estéril (extrato). O extrato foi plaqueado em meio 79, seletivo para bactérias Rhizobiceae, e foram coletados 35 bactérias sendo 12 de feijão-de-porco, 6 de mucuna, 12 de crotalária e 5 de guandu. Estas bactérias foram utilizadas para caracterização bioquímica. Nos testes foram observados a capacidade de crescimento em placa contendo 5 fontes de carbono a 10 mmol.L-1 (glicose, frutose, sorbitol, arabinose e ácido maleico), segundo Hungria (1994). Também foram realizados ensaios em placa para a detecção das enzimas protease, lipase, esterase e amilase, segundo Weir (2001). Os testes foram realizados em triplicatas e avaliados com 96 horas de crescimento. A partir dos dados foi construída uma matriz e esta utilizada para análise de similaridade utilizando o coeficiente de Jaccard (NTSYS) sendo obtido um dendrograma.

RESULTADOS:

Pela avaliação de crescimento em diferentes fontes de C, foi evidenciado que os meio contendo ácido maléico, glicose e frutose foram os que propiciaram o crescimento dos isolados. Por outro lado, a presença de atividade de lipase e protease foi uma característica pouco frequente entre os isolados. Apenas 3 isolados apresentaram a formação de halo no meio de protease, enquanto que 23 apresentaram em meio contendo amido. Pela análise de agrupamento foi observada a formação de 17 grupos com similaridade maior que 83%, contendo representantes de todas as plantas-iscas. A determinação do crescimento de rizóbios em diferentes fontes de carbono pode indicar a diversidade metabólica, a eficiência no processo de infecção e nodulação nas raízes. O metabolismo de carbono nestas bactérias é determinante para síntese de exopolissacarídeos, importante para a nodulação. Em nosso estudo foi observada preferência por açúcares simples e ácido maléico, que podem ser exudados pela maioria das plantas. A partir destes dados novos estudos, como a caracterização genética dos isolados e testes de campo relacionados ao emprego de bactérias diazotróficas do gênero Rhizobium em adubos verdes, devem ser realizados para determinar o potencial de uso destes isolados em produtos biotecnológicos.

CONCLUSÃO:

Através da análise do crescimento bacteriano em diferentes meios de cultura, foi possível traçar o perfil bioquímico e determinar a similaridade metabólica das 35 bactérias isoladas das raízes de mucuna, guandu, feijão de porco e crotalária.

Palavras-chave: Metabolismo bacteriano, Rhizobium, Adubos verdes.