63ª Reunião Anual da SBPC

C. Ciências Biológicas - 3. Bioquímica - 3. Enzimologia

PARÂMETROS CINÉTICOS E EFEITOS DE INIBIDORES NA ATIVIDADE DA GLICOSILTRANSFERASE

Verônica Trícoli de Souza 1 Jim Battagim 2 Patrícia de Oliveira Carvalho 3

1. Aluna de Farmácia/Iniciação Científica - Laboratório de Enzimologia e Biologia Molecular, Universidade São Francisco, Bragança Paulista - SP 2. Aluno de Mestrado em Ciências da Saúde - Laboratório de Enzimologia e Biologia Molecular, Universidade São Francisco, Bragança Paulista - SP 3. Profa. Dra./Orientadora – Laboratório de Enzimologia e Biologia Molecular, Universidade São Francisco, Bragança Paulista - SP

INTRODUÇÃO:

O S. mutans é considerado o mais cariogênico dos streptococcus orais. A enzima glicosiltransferase (GTF), produzida por esse microrganismo, decompõe a sacarose nos seus monossacarídeos: glicose e frutose, fazendo uso da glicose para formar os glucanos, principais responsáveis pela adesão e coesão intercelular entre as bactérias cariogênicas. A capacidade de compostos bioativos presentes em extratos vegetais de inibirem a biossíntese de polissacarídeos extracelulares por estreptococos orais pode ser importante na determinação do seu potencial cariogênico. O objetivo do trabalho foi investigar a atuação da GTF produzida por Streptococcus mutans na formação de glucanos e verificar o possível efeito inibidor do extrato de alecrim (Rosmarinus officinalis L.) e de mate (Ilex paraguariensis) sobre a atividade desta enzima.

METODOLOGIA:

Utilizamos no estudo a linhagem bacteriana de Streptococcus mutans ATCC 25175. O microrganismo foi crescido a 37°C em caldo BHI em anaerobiose. Determinou-se a concentração em hexoses neutras segundo o método do fenol-ácido sulfúrico. A preparação de extratos de GTF foi feita por centrifugação, dialisação e liofilização até obtenção do extrato bruto seco. Os açúcares redutores e a inibição da atividade da enzima pelos extratos vegetais foram determinados pelo método de Somogy-Nelson. A concentração de proteínas totais foi quantificada baseada na metodologia proposta por Lowry et al. A formação dos glucanos foi determinada em solução por espectrofotometria. Para a determinação da concentração inibitória mínima (CIM) foi utilizado um método modificado de diluição em caldo BHI. Os compostos fenólicos totais dos extratos aquosos foram quantificados de acordo com o método de Folin-Ciocalteau.

RESULTADOS:

Pôde-se identificar três fases do crescimento bacteriano. Passado o tempo de adaptação, as células começaram a dividir-se a uma taxa constante até atingirem um máximo de crescimento. Foi possível a obtenção de um extrato enzimático bruto (atividade de 13,4 ± 1,6 U/mL de meio) cuja capacidade de formar glucanos em presença de sacarose foi confirmada. Os extratos testados não foram capazes de inibir o crescimento de S. mutans, mas a presença do extrato aquoso de alecrim reduziu significativamente a concentração de açúcares redutores no meio, indicando inibição da atividade da enzima. Embora quantidades superiores de fenólicos totais tenham sido detectadas no extrato de chá-mate ele não teve efeito inibitório sobre a atividade da GTF. Isto sugere que a concentração desses compostos não determina a capacidade inibitória dos extratos analisados na atividade da enzima GTF, mas sim possivelmente a natureza destes compostos fenólicos presentes.

CONCLUSÃO:

Concluiu-se que o extrato aquoso de alecrim pode ser uma fonte valiosa para uso direto, ou ainda como precursor de novas moléculas bioativas a serem empregadas para a inibição da GTF.

Palavras-chave: Streptococcus mutans, glucanos, extratos naturais.