63ª Reunião Anual da SBPC

C. Ciências Biológicas - 3. Bioquímica - 6. Bioquímica

Extração e purificação parcial de lectina de Crotalaria juncea

Valberto da Silva Filho 1 Reinan de Oliveira da Cruz 2 Flavio Marques Lopes 3 Kátia Flávia Fernandes 4 Karla de Aleluia Batista 1,4,5

1. Faculdade Anhanguera de Anápolis - FAA 2. Faculdade Metropolitana de Anápolis - FAMA 3. Universidade Estadual de Goiás - UEG 4. Laboratório de Química de Proteínas - UFG 5. Profa. Msc./Orientadora - LQP - Universidade Federal de Goiás

INTRODUÇÃO:

A crotalária (Crotalaria juncea) pertence à família das leguminosas e está amplamente distribuída nas regiões de clima tropical e subtropical. Nestas plantas o papel fisiológico das lectinas está relacionado com a defesa contra insetos e outros predadores pelas suas propriedades hemaglutinantes. Entretanto, até agora poucas lectinas de crotalária foram isoladas e caracterizadas. As lectinas são uma ampla família de proteínas homólogas classificadas de acordo com a sua especificidade por determinando tipo sanguíneo, ou pela sua susceptibilidade à inibição da hemaglutinação por monossacarídeos. A capacidade de se ligarem a diversos açúcares torna essas moléculas promissoras para aplicação em biotecnologia, principalmente no que se refere à identificação de carboidratos em biopolímeros ou gliconjugados. Nesse sentido, o objetivo deste trabalho foi extrair e purificar parcialmente lectinas de sementes de Crotalaria juncea.

METODOLOGIA:

As sementes de Crotalaria juncea foram trituradas em moinho laboratorial e armazenadas em geladeira até o momento do uso. A extração das lectinas foi realizada em solução salina 0,15 mol L-1 e o sobrenadante (extrato bruto) foi usado para a determinação de proteínas e ensaio da atividade hemaglutinante. A atividade hemaglutinante foi determinada usando suspensão de hemácias de coelho a 2% (v/v) em solução salina 0,15 mol L-1. Uma unidade de hemaglutinação foi definida como sendo o inverso da maior diluição de uma dada solução que ainda foi capaz de aglutinar a suspensão de hemácias. A purificação parcial das lectinas de Crotalaria juncea foi conduzida em colunas cromatográficas de gel filtração com gel de dextrano-Sephadex G150. Adicionalmente foram realizados testes para determinação da especificidade da lectina por açúcares, incubando-se o extrato bruto ou a lectina purificada com soluções 1 mol L-1 dos açúcares manose, glicose, frutose e sacarose..

RESULTADOS:

As sementes de Crotalaria juncea, a exemplo de outros representantes da família das Leguminosae apresentam atividade hemaglutinante. Os extratos preparados em salina 0,15 mol L-1 apresentaram 60,22 (±1,16) mg de proteínas por grama de farinha. A atividade hemaglutinante apresentou título de 32, o que corresponde a uma atividade hemaglutinante específica de 8960 UH mg-1 de proteína ofertada. A purificação das lectinas utilizando cromatografia em Sephadex G150 por metodologia de batelada ou coluna demonstrou eficiente putificação das lectinas, observada pelo aumento do título da atividade hemaglutinante e pela análise da eletroforese em gel de poliacrilamida. Além disso, os testes de inibição por açúcares evidenciou que as lectinas de Crotalaria juncea apresentaram especificidade por manose, glicose e frutose.

CONCLUSÃO:

Os resultados encontrados permitiram concluir que é as sementes de Crotalaria juncea apresentam atividade hemaglutinante. A purificação parcial da lectina foi possível através de cromatografia em gel Sephadex G150, sendo que a utilização da metodologia de eluição em coluna foi mais eficaz na separação das frações. Além disso, a eletroforese em gel de poliacrilamida sob condições desnaturantes mostrou purificação parcial da lectina de Crotalaria juncea. Além disso, o fato destas lectinas serem ligantes de manose, glicose e frutose habilitam estas moléculas a serem utilizadas na elaboração de produtos para a determinação de açúcares, tornando-as com grande funcionalidade biotecnológica.

Palavras-chave: Crotalaria juncea, lectinas, hemaglutinação.